[发明专利]还原型辅酶Q10的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及还原型辅酶Q10的制备方法，尤其涉及使用酶转化法制备还原 型辅酶Q10的方法。

背景技术

辅酶Q10又名泛醌10，是一种脂溶性醌，在室温下是橙黄色结晶物，熔点 48℃，无臭无味，其结构类似于维生素K，因其母核六位上的侧链(聚异戊二烯 基的聚合度为10而得名)，是一种醌类化合物，结构式如下：

它的另一种形式为还原型辅酶Q10生理功能主要来源于醌基的氧化还原特 性和类异戊二烯侧链的物理特性，其在人体主要有两个作用，一是有明显的抗 脂质过氧化作用，二是营养物质在线粒体内转化为能量的过程中起重要的作用。 其醌环在氧化呼吸链中起传递电子和质子的作用，这种作用不仅是所有生命形 式必不可少的，而且还是形成ATP的关键。它是细胞自身的天然抗氧化剂和细 胞代谢激活剂，具有保护和恢复生物膜结构的完整性，稳定膜电位作用，是肌 体的非特异性免疫增强剂。目前临床应用于心脏病，肝炎等疾病的辅助治疗。

在肌体内起上述2个主要作用的是辅酶Q10的还原型，所以生产还原型辅 酶Q10是直接的作用，特别是天然的还原型辅酶Q10。但是还原型辅酶Q10容 易被分子氧氧化，在工业规模生产还不能达成。此外还原型辅酶Q10是氧化型 辅酶Q10的二电子还原体，为白色结晶。已知用还原剂将氧化型辅酶Q10还原 方法生成还原型辅酶Q10的方法(如WO01/52822A1)。但是使用这种化学还原剂 所生产的还原型辅酶Q10在用于保健食品，饮料，化妆品，药品等时存在着分 子氧氧化的问题。至今还没有商业化还原型辅酶Q10。同时，怎么保护和稳定 还原型辅酶Q10，还没有一个真正的解决办法。

另外，现有的生产还原型辅酶Q10的方法上存在着大量使用化学还原剂或 者添加保护剂添加剂，有机溶剂等。用于药品食品化妆品等组合，无疑首先是 对环境的污染，其次用于人体是否安全，可靠显然存在有大量问题。特别是这 些还原剂，保护剂等的组合对人体的危害远大于辅酶Q10的正性作用。

发明内容

为了解决上述的还原型辅酶Q10制备存在的技术问题，本发明的目的是提 供一种使用酶转化法制备还原型辅酶Q10的方法，该方法制备得到的产品为纯 天然品，安全可靠。

为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

还原型辅酶Q10的制备方法，该方法包括以下的步骤：①氧化型辅酶Q10 原料进行磷酸化；②通过生物还原酶还原磷酸化的氧化型辅酶Q10；③提取还 原反应物中的还原型辅酶Q10。上述步骤的反应方程式如下：

作为优选，上述的步骤②中的生物还原酶的制备方法如下：

(1)选择含有辅酶Q10的细菌、酵母菌或真菌进行培养；

(2)破碎细胞体，用30％～70％重量百分比浓度的硫酸铵沉淀；

(3)分离沉淀物、透析得到所述生物还原酶。

采用上述的方法制备得到的生物还原酶与磷酸化的氧化型辅酶Q10具有良 好的还原性能，提高了还原型辅酶Q10的得率。

作为优选，上述的步骤(1)选用光合菌或红极毛杆菌。

作为优选，上述的步骤(2)破碎细胞体采用超声波细胞破碎机。

作为优选，上述的步骤(3)的方法如下：沉淀后在35℃～45℃水浴1～2 小时，用冷冻离心机在1℃～3℃，10000～15000转/分钟的条件下离心10～30 分钟，弃上清，加入磷酸缓冲液透析。

作为再优选，透析后加入Sepharose 4B搅拌，用磷酸缓冲液分三次清洗， 加氢氧化钠调PH8.5，解离；过滤后的液体用冷冻干燥机冻干，得所述的生物还 原酶。上述的方法提供生物还原酶的精制方法，提高生物还原酶的纯度。

作为优选，上述的步骤①中氧化型辅酶Q10进行磷酸化的步骤是：在28℃～ 45℃的条件下，将氧化型辅酶Q10溶解在磷酸缓冲液中，按照氧化型辅酶Q10 重量的2～10％加入磷酸酯或者任何一种磷酸酯盐类，搅拌10～120分钟。上述 的技术方案提供了一种氧化型辅酶Q10磷酸化的方法，该方法具有操作简便的 特点。

作为再优选，上述的磷酸缓冲液的PH值为6.0～8.2。