[发明专利]还原型辅酶Q10的制备方法

权利要求书

1.还原型辅酶Q10的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

一、氧化型辅酶Q10原料进行磷酸化

在37℃的条件下，将250克氧化型辅酶Q10溶解在1000毫升pH7.4的磷酸缓冲液中，按照氧化型辅酶Q10重量的5％加12.5克磷酸酯，搅拌30分钟；

二、生物还原酶的制备

(1)选择含有辅酶Q10的细菌或真菌放置在光照培养箱中培养72小时，所述的细菌为红假单胞菌，所述真菌为粟酒裂殖酵母；

(2)收集培养液，用6000转/分钟的离心机离心20分钟，离心后的菌体用超声波细胞破碎机破碎，加入200毫升3％重量百分比浓度的盐水静置1小时；取上清液，加入500毫升的50％重量百分比浓度的硫酸铵沉淀；

(3)沉淀后在40℃水浴1.5小时，用冷冻离心机在1～3℃，12000转/分钟条件下离心20分钟；弃上清，加入300毫升磷酸缓冲液透析，透析后加入100毫升Sepharose 4B搅拌，用200毫升磷酸缓冲液分三次清洗，加氢氧化钠调pH8.5，解离；过滤后的液体用冷冻干燥机冻干，得所述的生物还原酶；

三、通过生物还原酶还原磷酸化的氧化型辅酶Q10

在37℃～60℃的条件下，将制备好的磷酸化氧化型辅酶Q10，加入反应器中，加入80mg制备的生物还原酶，搅拌10～30分钟；

四、提取还原反应物中的还原型辅酶Q10

采用0.5MPa，30℃条件下，膜压过滤前述还原反应物，提取生成物，滤液放置2℃中5小时以上；滤过液在35℃，200Pa的真空度条件下进行真空浓缩，浓缩物加入1000ml水洗3次，在2℃条件下结晶，冷冻干燥结晶物，即得到所述还原型辅酶Q10。