[发明专利]补铁剂铁脂质体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的补铁剂，特别是铁脂质体及其制备方法，属于生物科学技术领域。

背景技术

缺铁性贫血是目前我国和国际上最常见的疾病之一，补铁的药品和营养品种类繁多，但由于肠铁的吸收机制未被阐明，人们在未知机制的情况下，开发了多种补铁剂，具有很大的盲目性，效果不甚理想，有些还具有很大毒性，较差的口感性和对消化道的刺激性。随着近年来对肠铁吸收机制的了解让我们得知了肠铁的吸收机制和调控途径，为开发和生产新型补铁剂提供了理论依据。血红素铁是一种生物态铁，与其它的补铁剂相比有较高的生物利用率，可直接被肠道粘膜细胞吸收，消化道刺激症状轻。然而，由于它由卟啉和一分子亚铁构成卟啉化合物，结构不稳定，易氧化，且不溶于水，还带有特殊气味。更重要的是，如果与血红素铁吸收的基因突变或受到低表达调控，将会阻止和抑制血红素铁的吸收，这些特点大大限制了其在食品、保健品等工业中的应用，尤其是作为口服保健品，上述特性使其开发应用受到一定限制。其他无机的补铁剂如硫酸亚铁，柠檬酸铁等能对消化道产生刺激作用，使用不当还会引起中毒症状，对于炎症性贫血和遗传原因造成的贫血没有缓解作用。近年来，脂质体作为一种新型的生物药剂载体，已被广泛应用。脂质体是一种由脂质双分子层组成，内部为水相的闭合囊泡，大小从几十纳米到几十微米，在脂质体的水相和膜内可以包裹多种物质。有天然膜成分组成的脂质体，其脂质体膜的双层结构原则上与天然细胞膜一样，分散在水中时形成多层囊泡，而且每一层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开，适合于生物体内吸收和降解。脂质体无毒性和无免疫原性，作为药物载体，具有靶向性。临床使用，具有减少药物用量，提高吸收效率，降低毒性等优势。虽然脂质体作为药物载体具有以上优良性能，但现有文献中未发现有关铁脂质体(或称为脂质体铁)的相关报道。

发明内容

本发明的目的是针对目前各种补铁制剂在实际应用中的局限性和脂质体作为药物载体的优点，提供一种新型补铁剂铁脂质体(或称为脂质体铁)。

本发明的目的还在于提供一种铁脂质体的制备方法。

本发明的铁脂质体的组成以质量份数比表示为：

血红素铁和/或无机铁∶胆固醇∶卵磷脂＝(0.1～200)∶(1～10)∶(10～100)

本发明的铁脂质体由脂质双分子层组成，内部为血红素铁和/或无机铁PBS溶液水相的闭合大单室囊泡，粒径为1.2～0.2μm，其中经过0.8μm的滤膜过滤后，平均粒径为0.59±0.05μm，最大包封率为36％。

本发明的铁脂质体的制备方法包括以下步骤：

(1)将质量比(1～10)∶(10～100)的胆固醇和卵磷脂在25～38℃恒温条件下用乙醇溶液完全溶解；

(2)按血红素铁和/或无机铁∶胆固醇∶卵磷脂以(0.1～200)∶(1～10)∶(10～100)的质量比称取血红素铁和/或无机铁，完全溶入PBS中，其中，卵磷脂∶PBS固液比为1∶15，得到PBS铁溶液；

(3)将步骤(1)得到的完全溶解的卵磷脂-胆固醇溶液在45～50℃条件下缓慢滴入步骤(2)所得高速旋转的PBS铁溶液中，然后在45～50℃条件下恒温搅拌或旋转蒸发2～5h，使乙醇充分挥发，得到均匀乳状脂质体混悬液；

(4)将所得到的脂质体混悬液用探针式超声200～300W在冷水浴条件下分散10～15min，静置1～2h，然后用不同孔径的滤膜反复过滤5～35次得到直径在0.2～1μm的铁脂质体，入棕色瓶，静止1～2h，制得补铁剂铁脂质体，充N₂密闭、4℃保存。

步骤(2)中PBS的PH值为6.0～7.5更好。

将上述方法制得的铁脂质体混悬液分别用普通生物显微镜、透射电镜进行观察，普通生物显微镜观察，脂质体轮廓清晰，呈圆球状囊形颗粒(见附图1)；透射电镜采用磷钨酸负染法进行，脂质体呈典型单室，其双分子膜规整、均一、连续，呈圆形微球体(见附图2)。

取上述方法制备的铁脂质体混悬液，分别经过不同孔径的滤膜，粒径为 1.2～0.2μm，其中经过0.8μm的滤膜过滤后，经相应的水合介质稀释后，用JI-1155型激光散射粒度测定仪测定脂质体的粒径及分布，有效粒径0.59±0.05μm(见附图3)。

取2ml铁脂质体于透析袋中，透析去掉PBS中多余铁，取出，置10ml的离心管中，再加入相应体积的乙醚，混匀超声后离心。离心条件为25℃，3500g，20分钟，然后再用4000g，10分钟。弃上清，下部为铁溶液，用分光光度法测定，得出脂质体中铁的含量，进而计算出铁脂质体的包封率在30-36％。