[发明专利]二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯的制备和分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及二十二碳五烯酸(DPA)甲酯和二十二碳六烯酸(DHA)甲酯的制备和分离方法。

背景技术

微藻是一类含有叶绿素的海洋微生物，其生长习性于藻类相同。研究表明，微藻脂肪中含有丰富的ω-3多烯脂肪酸。医学界的多年研究，已经证实ω-3多烯脂肪酸对人体健康有多种独特的生理功效，尤其是EPA(二十碳五烯酸)、DPA(二十二碳五烯酸)和DHA(二十二碳六烯酸)，其独特的保健功效被越来越多的人认可和接受。目前人类使用的ω-3多烯脂肪酸保健品中的有效成分多来自深海鱼油和海豹油。随着世界海洋渔业资源告急，以及鱼油易受重金属污染等问题的存在，使鱼油的应用受到了限制；每年北极地区对海豹的屠杀更是引起全世界的不满。近年来的研究表明，海洋微藻才是ω-3多烯脂肪酸的真正合成者，鱼类和海豹体内的ω-3多烯脂肪酸均是摄取自各自的食物链。而且微藻具有易于培养和易于控制生产规模，总脂含量高，脂肪中ω-3多烯脂肪酸含量高等特点，因此越来越受到人们的重视。另一方面，人们也发现不同的ω-3多烯脂肪酸，其生理功能也不同，例如：EPA具有改善血液循环、软化血管、调整血脂、降低血压和血糖以及抗炎作用，适合中老年人服用。DHA具有营养大脑、促进胎儿和儿童大脑发育、保护视力、调节免疫和抗癌作用，DPA也具有促进青少年大脑发育的作用，适合在青少年的食谱中添加。但由于EPA对青少年发育所必需的花生四烯酸的摄取有竞争作用，会对青少年视力及大脑的发育产生不利影响。微藻油脂肪酸成分较为简单，在含有丰富DPA和DHA的同时，不含或只含极少量EPA，便于加工成面向不同人群的保健食品，尤其是适合作为青少年食品营养添加成分。同时DPA和DHA的生理功用也有一些差别，如将两者分离开来，再针对不同的目标人群加以调配，可以更好的发挥各自的功能，提高产品效能。

本发明采用的硝酸银柱法是利用Ag⁺能与不饱和脂肪酸中的碳碳双键可逆反应生成络合物的性质，生成的络合物的稳定性与脂肪酸分子中双键数和分子量有关，分子量越小，双键数越多，生成的络合物越稳定。不同脂肪酸分子的双键数和分子量都不相同，因此可以用不同极性的洗脱液将它们分别洗脱下来，从而达到分离的目的。利用该方法可以从微藻油中分别获得高纯度二十二碳五烯酸(DPA)甲酯和二十二碳六烯酸(DHA)甲酯。

申请号03150169.9公开了一种从鱼油中提取高纯EPA、DHA的方法，其方法采用乙酯化工艺，皂化反应时间长达10小时。由于多不饱和脂肪酸具有热不稳定性，在受热情况下会产生较多自由基，会影响产品品质。事实上，多不饱和脂肪酸甲酯和乙酯均难于被人体吸收，需在后续处理中将其转化成甘油脂才能作为食品添加成分。因此甲酯化受热时间短，可以有效减少多不饱和脂肪酸的损失。

申请号03113397.5公开了一种经卤虾蛋白粉制取DHA价值的方法，该法前期制取卤虾粉工艺复杂，且也采用乙酯化方法，降低了得率。

发明内容

本发明目的是利用硝酸银柱法得到高纯度二十二碳五烯酸(DPA)甲酯和二十二碳六烯酸(DHA)甲酯，其中DPA含量由原料油的20.32％提高到99.61％，DHA含量44.83％提高到99.02％以上，硝酸银柱法收率均在90％以上，尤其是二十二碳五烯酸(DPA)甲酯的提纯工艺为本专利之首创。

在对二十二碳五烯酸(DPA)甲酯和二十二碳六烯酸(DHA)甲酯及其制备方法充分理解的基础上，我们经过大量的探索和试验提出了本发明，本发明的工艺方法发挥了硝酸银柱法的优势，可以从微藻油中分别获得高纯度二十二碳五烯酸(DPA)甲酯和二十二碳六烯酸(DHA)甲酯。

本发明的二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯的制备方法，是以微藻油为原料制备的二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸混合脂肪酸制备二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯。

其方法如下：采用BF₃甲酯化法，取从微藻油中得到的二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸混合脂肪酸与BF₃-甲醇溶液混合，60～75℃下水浴回流10～30分钟，加入饱和NaCl溶液除去BF₃，正己烷萃取混合甲酯后，蒸发除去溶剂即得混合脂肪酸甲酯。

本发明的二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯的分离方法，是采用硝酸银柱法进行分离。

所述的二十二碳五烯酸甲酯和二十二碳六烯酸甲酯的分离方法，其步骤如下：将混合脂肪酸甲酯以硝酸银硅胶柱层析，使用浓度梯度为0.5％～15％的丙酮-正己烷溶液为洗脱剂梯度洗脱，所得洗脱液蒸去溶剂后用气相色谱检测，合并相同组分的洗脱液，可分别得到高纯度DPA甲酯和DHA甲酯。