[发明专利]一种快速检测沙门菌的方法

权利要求书

1.一种沙门菌核酸环介导等温扩增检测方法，包括设计沙门菌invA特异性引物，其特征在于，其中外引物F3(forward outer primer)为：TGTTACGGCTATTTTGACCA；外引物B3为(forward outer primer)：TCGAGATCGCCAATCAGT；内引物FIP(backward inner primer)为：AGAGTACGCTTAAAACCACCGA-TTTCAATGGGAACTCTGCC；内引物BIP(backwardinner primer)为：TAGCGCCGCCAAACCTAAAA-CCTAACGACGACCCTTCT。

2.根据权利要求1所述的沙门菌的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，包括样品DNA的提取：细菌培养物1mL于12000r/min离心5min；沉淀用0.8mL1×TE(100mmol/L Tris-Cl，10mmol/L EDTA，pH8.0)洗涤，12000r/min离心5min，沉淀加入100μL无菌水，混匀后，于100℃沸水浴15min，立即冰浴5min，12000r/min离心5min，上清液即为DNA模板。

3.根据权利要求2所述的沙门菌的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，25μL扩增反应体系包括10×LAMP bufffer 2.5μL，10mmol/L Mg²⁺4.0-6.0μL，10mmol/LdNTP 1.5-2.5μL，10mmol/L betaine 1.5-2.5μL，0.5μmol/L的FIP和BIP各2μL，0.25μmol/L的F3和B3各0.5μL，样品中提取的DNA模板2.0-5.0μL，Bst DNA聚合酶8U/μL 1μL，不足部分用超纯水补足。

4.根据权利要求3所述的沙门菌的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，扩增反应条件为63℃～65℃水浴锅温浴60min，80℃加热2min-10min终止反应。

5.根据权利要求4所述的沙门菌的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，扩增结果的检测可以直接观察反应混合液中是否出现白色沉淀。如果出现白色沉淀，则为阳性结果，如果未出现上述现象，则为阴性结果。

6.根据权利要求5所述的沙门菌的环介导等温扩增检测方法，其特征在于，另一种检测结果的方法是取反应后的混合液2μL，加入0.5μL溴酚蓝上样缓冲液，在2％的琼脂糖凝胶中电泳，电压100V，时间30min，在0.5μg/mL溴化乙锭溶液中浸泡20min，置于凝胶成像系统照相，如果出现梯度条带，则为阳性结果，如未出现，则结果为阴性。