[发明专利]一种人载脂蛋白AV单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的说，涉及一种单克隆抗体，更具体地说，涉及一种人载脂蛋白AV单克隆抗体及其应用。

背景技术

载脂蛋白AV是2001年Pennacchio等发现的一种新的载脂蛋白，它位于ApoAIV下游-27kb的位置，与小鼠ApoAV和人类ApoAIV的碱基序列高度同源，其表达的蛋白质与相邻基因产物ApoAIV也有高度的同源性，故命名为ApoAV。

根据研究显示，ApoAV与血脂水平有关，特别是与甘油三酯水平密切相关，而甘油三酯是冠心病独立的危险因素，载脂蛋白AV是目前为止发现的唯一与甘油三酯代谢有关的载脂蛋白。因此，制备ApoAV单克隆抗体，以用于测定人血清中ApoAV浓度，对于尽早筛选出冠心病高危人群并进行及时预防与早期治疗具有重要意义。

而现在尚未见到有关于ApoAV单克隆抗体的报道。

发明内容

本发明的目的，在于提供一种人载脂蛋白AV的单克隆抗体，以用于测定人血清中ApoAV浓度。

本发明的第二个目的，在于提供所述人载脂蛋白AV的单克隆抗体的制备方法。

本发明的第三个目的，在于提供所述人载脂蛋白AV的单克隆抗体的应用。

本发明的第四个目的，在于提供用于一种人载脂蛋白AV的检测产品。

本发明的第五个目的，在于提供一种可产生人载脂蛋白AV的单克隆抗体的融合细胞。

本发明的人载脂蛋白AV的单克隆抗体，通过将人载脂蛋白AV免疫小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，然后培养融合细胞而获得。

相应的，本发明的人载脂蛋白AV的单克隆抗体的制备方法包括以下步骤：

A、用人载脂蛋白AV免疫小鼠；

B、取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合；

C、培养融合细胞以获得人载脂蛋白AV的单克隆抗体。

本发明提供的人载脂蛋白AV单克隆抗体可用于检测人载脂蛋白AV。

本发明的人载脂蛋白AV的检测产品利用所述人载脂蛋白AV的单克隆抗体制备。

根据本发明，所述检测产品可以是快速检测产品，优选的，所述快速检测产品为胶体金试纸条或ELISA试剂盒。

使用本发明提供的Apo AV的单克隆抗体可用于检测血清中的Apo AV，使用Apo AV单抗检测ApoAV时，其线性检测范围大，血清中的ApoAI、ApoB和Lp(a)对检测结果无影响，且检测结果稳定性好；因此，可使用本发明提供的Apo AV单克隆抗体制备相应的检测产品，以测定人血清中ApoAV浓度，尽早筛选出冠心病高危人群并进行及时预防与早期治疗。

附图说明

图1是PCR产物凝胶电泳结果，其中，泳道1为蛋白Marker(DL2000)，泳道2为PCR产物。

图2是western blot检测Apo AV的电泳结果，其中，泳道M为蛋白标准，泳道1为重组ApoAV蛋白，泳道2为原倍人血清标本。

图3是重组ApoAV蛋白标准曲线。

图4是人血清滴度曲线。

本发明所获得的可产生人载脂蛋白AV的单克隆抗体的融合细胞AV2G1和AV1F1，已于2008年4月2日提交中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号分别为CCTCC NO：C200805和CCTCC NO：C200804。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆：实验室手册》(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件进行。

在下述实施例中使用的样本稀释液配方为：1％BSA+0.1％Triton X-100 0.1M Tris pH8.0。

在下述实施例中所有数据均采用SPSS 11.0统计软件分析，正态性检验用Shapiro-Wilk，相关性分析用Spearman计算相关系数。

在下述实施例中，血清TG，TCHO，HDL-C及LDL-C的测定，均采用酶法在日立7170全自动分析仪上完成。

实施例1、抗原的制备