[发明专利]一种对猪体核酸疫苗具有免疫增强作用的CpG基序

权利要求书

1、一种对猪体核酸疫苗具有免疫增强作用的CpG基序，用于其合成的引 物序列为：

7-A：CTCATCGATCCTATCGATCCTATCGATCCTATCGATCCTATCGATCCTATCGATGGGCC

7-B：CATCGATAGGATCGATAGGATCGATAGGATCGATAGGATCGATAGGATCGATGAGGGCC。

2、一种对猪体核酸疫苗具有免疫增强作用的CpG基序，其免疫增强作用的 检测步骤如下：

1)选择120日龄健康猪15头为原料备用；

2)外周血淋巴细胞的分离培养；

3)脾脏免疫细胞的分离；

4)活力检测与计数；

5)外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞增殖试验，即MTT法；步骤如下：

a将96孔细胞培养板分成12组，每组三孔；将悬浮细胞的细胞培养液加入 细胞培养板，从第一组至阴性对照，每组三个重复，每孔150μL；

b空白对照孔加入150μL无细胞的细胞培养液，三个重复；

c将CpG基序调整为100μg/mL，样品分别加入第1组至第9组，每组三个 重复，每孔10μL；

d阳性对照加入ConA 100μg/mL，三个重复，每孔10μL；空白对照加入细 胞培养液，三个重复，每孔10μL；

e将细胞培养板放入置37℃，CO₂培养箱中培养48h，每孔加入10ulMTT， 5μg/μL，继续培养4h，然后每孔加入100μL的DMSO，使紫黑色结晶完全溶解， 测定OD₄₉₀的值，同时设不加细胞的营养液对照，以待测样品D₄₉₀减去培养液对 照孔D₄₉₀，即为试验孔A值；以刺激指数“SI”作为判断淋巴细胞转化程度的 参数，应用方差分析进行差异显著性检验；

6)数据处理

以刺激指数(SI)作为判断淋巴细胞转化程度的参数，SI大于2具有刺激 效果，应用公式计算如下：

SI＝(ODs-ODb)/(ODn-ODb)

ODs：样品(samole)孔OD值；

ODb：空白(blank)孔OD值；

ODn：阴性(negative)孔OD值。