[发明专利]快速测定细胞角蛋白19(CK19)的方法和其引物及探针

权利要求书

1.一种测定CK19mRNA的方法，其包括

(a)使用引物扩增mRNA的部分，和

(b)使用两个探针检测所形成的扩增物；

其中所述引物是

-第一引物，其具有能使其与位于CK19基因的第一外显子上的区域杂交的序列，和

-第二引物，其具有能使其与位于第一外显子下游的CK19基因的第二外显子上的区域杂交的序列，

其中至少一个所述引物的序列在其3’末端含有至少一个与上述CK19假基因的错配，以及任何一个所述引物含有至少两个与上述CK19假基因的错配；且

其中所述的探针是

-第一探针，其具有能使其与位于所述第一引物结合的区域下游和所述第二引物结合的区域上游的CK19基因的外显子的3’末端的区域杂交的序列，和

-第二探针，其具有能使其与位于所述第一探针结合的区域下游和所述第二引物结合的区域上游的CK19基因的相邻外显子5’末端的区域杂交的序列，

一个所述探针用供体标记，以及另一个所述探针用受体标记。

2.根据权利要求1的方法，其中所述供体是FITC(异硫氰酸荧光素)，且所述受体选自罗丹明染料和花菁染料。

3.根据权利要求1或2的方法，其中所述第一探针在其3’末端用供体标记，且其中所述第二探针在其5’末端用受体标记。

4.根据权利要求1-3中任何一项的方法，其中所述第一探针与位于CK19基因的外显子4的3’末端的区域杂交，以及所述第二探针与位于CK19基因的外显子5的5’末端的区域杂交。

5.一种同时测定CK19mRNA和CK20mRNA的方法，其包括

(a)使用用于CK19的一组引物和用于CK20的一组引物扩增mRNA的部分，和

(b)使用用于CK19的一组探针和用于CK20的一组的探针检测所形成的扩增物；

其中所述的CK19mRNA的引物是

-第一引物，其具有能使其与位于CK19基因的第一外显子上的区域杂交的序列，和

-第二引物，其具有能使其与位于第一外显子下游的CK19基因的第二外显子上的区域杂交的序列，

其中至少一个所述引物的序列在其3’末端含有至少一个与上述CK19假基因的错配，以及任何一个所述引物含有至少两个与上述CK19假基因的错配；且

其中所述的CK19mRNA的探针是

-第一探针，其具有能使其与位于所述第一引物结合的区域下游和所述第二引物结合的区域上游的CK19基因的外显子的3’末端的区域杂交的序列，和

-第二探针，其具有能使其与位于所述第一探针结合的区域下游和所述第二引物结合的区域上游的CK19基因的相邻外显子5’末端的区域杂交的序列；

其中所述的CK20mRNA的引物是

-第三引物，其具有能使其与位于CK20基因上的区域杂交的序列，和

-第四引物，其具有能使其与位于第三引物下游的CK20基因上的区域杂交的序列，且

其中所述的CK20mRNA的探针是

-第三探针，其具有能使其与位于所述第三引物结合的区域下游和所述第四引物结合的区域上游的CK20基因上的区域杂交的序列，和

-第四探针，其具有能使其与位于所述第四引物结合的区域上游和所述第三探针结合的区域下游的CK20基因上的区域杂交的序列，

其中用于检测CK19的探针用供体和受体标记，将用于检测CK20的探针用供体和受体标记，其中CK19供体/受体对与CK20供体/受体对不同。

6.根据权利要求5的方法，其中用于CK19检测的一组探针和用于CK20检测的一组探针含有相同的供体，而用于检测CK19的受体不同于用于检测CK20的受体。

7.根据权利要求5或6的方法，其中将所述第一和第三探针在其3’末端用供体标记，其中将所述第二和第四探针在其5’末端用受体标记。

8.根据权利要求5-7中任何一项的方法，其中所述供体是FITC，且所述受体选自罗丹明染料和花菁染料。

9.根据权利要求5-8中任何一项的方法，其中所述第一探针与位于CK19基因的外显子4的3’末端的区域杂交，以及所述第二探针与位于CK19基因的外显子5的5’末端的区域杂交。