[发明专利]以无血培养基制备A群链球菌制剂的方法及无血培养基

权利要求书

1、一种以无血培养基制备A群链球菌制剂的方法，该方法包括以下步骤：

无血培养基的准备：将无血培养基在4500r/min的条件下离心30min、抽滤，以保证培养基澄清无杂质，然后灭菌待用；

传代：在无菌室内开启A群链球菌弱毒株工作种子批，在斜面培养基上在37℃的条件下，培养20小时传三代，然后分别接种在无血培养基，在37℃、120r/min的条件下振荡培养20小时制备种子液，在传代前要进行革兰氏染色镜检，如发现污染杂菌则废弃；

制备A群链球菌制剂；将制好的生产用种子液接种在无血培养基中，在37℃、140r/min的条件下振荡培养20小时，在接种前要进行革兰氏染色镜检，如发现污染杂菌则废弃；

菌体灭活：将青霉素和过氧化氢加入培养物内灭活，经过振荡、45℃水浴30min，4500r/min离心30min；

产品收集：经过菌体灭活后的培养物用生理盐水悬浮，二次离心后将沉淀物在-37℃冻干72小时得到白色菌体干粉制剂即A群链球菌制剂，称重后密封保存于无菌瓶中。

2、一种用于制备权利要求1所述的A群链球菌制剂的无血培养基，其重量配比为：胰蛋白胨1.2％、葡萄糖0.9％、酵母粉0.4％、氯化钠0.5％、磷酸二氢钾0.5％、其余为水；pH值为7.4～7.6。