[发明专利]细菌基因组DNA抽提液及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种细菌基因组DNA抽提液，由体积百分比为50～70％的甲液和30～50％的乙液组成，其中

甲液是由chelex-100、SDS、NP-40、吐温和水组成，且浓度分别为5％～20％g/ml、0.03％～3％g/ml、0.5％～5％V/V和0.5％～5％V/V，其余为水；

乙液是由溶葡萄球菌素原液、破壁酶原液和蛋白酶K原液组成，且体积比为0.5～1.5∶4.5～5.5∶0.75～1.75，其中，破壁酶原液浓度10U/μl，蛋白酶K原液浓度20mg/ml。

2.如权利要求1所述的细菌基因组DNA抽提液，其特征在于：乙液中，溶葡萄球菌素的原液浓度为2mg/ml。

3.权利要求1或2所述的细菌基因组DNA抽提液的制备方法，包括下列步骤：

①取SDS、NP-40和吐温加入水中混合，然后过滤除菌，最后加入适量chelex-100，配成浓度分别为SDS 0.03％～3％g/ml、NP-400.5％～5％V/V、吐温0.5％～5％V/V和chelex-1005％～20％g/ml的混合物，制得甲液；

②将溶葡萄球菌素、破壁酶和蛋白酶K的原液按0.5～1.5∶4.5～5.5∶0.75～1.75的体积比混合，YM-100蛋白过滤柱过滤后离心，制得乙液；

③按比例将经步骤①得到的甲液加入步骤②得到的乙液中。

4.使用权利要求1或2所述的细菌基因组DNA抽提液用以提取血液及血小板制品中细菌DNA的方法，包括以下步骤：

①取标本50～5000μl，10000～15000g/分钟，离心10～15min收集细菌；

②弃上清液，加入上述的抽提液25～250μl；

③30～37℃孵育30～60分钟，50～65℃孵育20～120分钟；

④加热煮沸5～20分钟，于0℃放置5～120秒；

⑤10000～15000g/分钟，离心10～15分钟，所得上清液即为细菌基因组DNA。