[发明专利]一种达托霉素的合成方法

说明书

技术领域：

本发明涉及新型抗生素达托霉素(Daptomycin)的一种合成方法。特别涉及固液相结合的达托霉素合成方法。

背景技术：

近年来随着抗生素应用的增多，细菌的耐药性问题日益严重。在美国，临床上分离到的金葡菌有95％对青霉素耐药，50％以上对甲氧西林耐药(FrindkinSK，Gaynes RP.Antimicrobial resistance in intensive care units.ClinChest Med.1999，20(2)：303-316)；在日本，耐甲氧西林金葡菌(MRSA)在皮肤感染中的比例逐年上升(Nishijima S.The incidence of isolation ofmethicillin-resistant Staphylococus aureus(MRSA)strains from skininfections during the past three years.J Dermatil，1993，20(4)：193-197)。尽管万古霉素常常被认为是抵抗革兰阳性菌感染的最后防线，但这道防线并非牢不可破，20世纪80年代以来，万古霉素耐药菌株有增长趋势，包括耐万古霉素金葡菌和肠球菌(The centers for Disease Control and Prevention.Staphylococus aureus with reduced sueceptibility to vancomycin-UnitedStates 1997.JAMA，1997，278(11)：891-892)。

革兰阳性菌是皮肤感染中很常见的致病菌，随着MRSA对万古霉素的敏感性下降，作用机制不同于万古霉素的抗生素显得极其重要。2003年9月，美国FDA批准注射用Daptomycin(商品名cubicin)用于治疗复杂性皮肤及皮肤软组织感染(cSSSIs)，包括较大的脓肿，术后切口感染和感染性溃疡，特别是由金葡菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌似马亚种(Streptococcus dysgalactiaesubspecies equisimilis)以及耐万古霉素粪肠球菌引起的感染(Cubicin[packageinsert].Lexington，Mass：Cubist Pharmaceuticals，Inc.；2003)。

Daptomycin最初由Lily公司开发，于1994年转让给C u b i s t制药公司，Daptomycin的整个开发时间长达22年之久，是具有着独特抗菌特性的环脂肽类抗生素。独特的作用机制使得细菌对Daptomycin产生耐药性可能会比较困难。目前，Daptomycin是由玫孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)发酵制得，由于专利保护等各种原因，玫孢链霉菌不易得。

发明内容：

本发明的目的是提供一种Daptomycin的合成方法，通过固液相结合，首次人工合成Daptomycin。主要解决现有以玫孢链霉菌作为原料合成成本过高的技术问题。

本发明的方法包括如下步骤：

以2-氯三苯甲基氯树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，其中Fmoc-AA、DIC、HOBT三者间重量比为1∶1∶1，Fmoc-AA缩合过量2～5倍，获得保护十肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，每一步连接氨基酸缩合都经过kaiser test检测，如反应呈阳性则重复接氨基酸。同样的固相方法连接正癸酸，至kaiser test检测阴性，无需脱去Fmoc-保护基团步骤。通过酯化的步骤连接下一个氨基酸，Fmoc-AA、DIC、DMAP三者间重量比为3∶3∶1，Fmoc-AA缩合过量1～2倍，一次反应时间为2～4h，连续反应两次，反应结束无需kaiser test检测，直接脱去Fmoc-保护基团。同样的固相方法连接剩余的两个氨基酸，并依次脱去Fmoc-保护基团。

用1～2％TFA或CH₂Cl₂溶液将全保护肽从树脂上切下，处理切割液浓缩至干，加入乙醚析出固体，干燥。

液相环化时，需添加环化剂：PyBOP、HOAT，全保护多肽∶PyBOP∶HOAT三者间重量比为1∶2∶2，全保护多肽的浓度为10^-3～10^-4mol/L，有机溶剂为DMF，CH₂Cl₂或THF中的一种，反应过夜。