[发明专利]一种复合菌种发酵剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程微生物发酵领域，具体涉及一种乳酸菌——酵母菌复合发酵剂及其制备方法。

背景技术

Kefir(开菲尔)起源于高加索山区，它是用开菲尔粒子发酵牛奶而产生的一种乳酸--酒精性发酵饮料，由于其复杂的菌系、特殊的营养作用和保健功能，引起人们对它广泛的研究，但由于在不使用原粒子的情况下无法生成新粒，因此产业化难于发酵出和粒子发酵产物一致或功能相近的饮料。

发明内容

本发明的目的在于模仿原始开菲尔的特性，用纯发酵剂复合和优化培养研制-种复合菌种发酵剂，进而研制开菲尔饮料，该法制成的开菲尔可解决用开菲尔粒子直接发酵难于产业化的问题，并能保持菌种在乳生产中的稳定性。本发明的另一个目的是提供了该复合菌种发酵剂的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：利用公知菌种德氏乳杆菌保加利亚亚种(L.delbrueckiisubsp.bulgaricus)ATCC No.33409^*，乳酸乳球菌(L.lactis)CGMCC No.12030，肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)CCIC No.6055，嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)ATCC No.43121，干酪乳杆菌(L.casei)ATCC No.393，克鲁维酵母(Kluyveromyces)CCIC No.1772和酿酒酵母(saccharomycescerevi)ATCC No.15248进行高密度培养后真空冷冻干燥，制成直投式单菌发酵剂再以等量细胞数目复合成复合菌种发酵剂。

该复合菌种发酵剂的制备方法如下：1、首先，对菌种德氏乳杆菌保加利亚亚种、乳酸乳球菌、肠膜明串珠菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、克鲁维酵母和酒香酵母，进行高密度培养，方法和步骤如下。

各菌以3～5％培养基的量接种到优化培养基中，全自动发酵罐培养，流加无菌30％Na₂CO₃溶液控制发酵过程中的pH值，培养3～6小时后添加培养基量的0.1～20％增殖因子，培养3～6小时后流加相同体积的优化培养基继续培养，继续培养4～10小时后收集发酵液。2、其次对各菌种培养基再分别发酵。①德氏乳杆菌保加利亚亚种：以12％脱脂奶+蛋白水解酶为优化培养基，以3～5％麦芽汁+3～5％酵母粉+5～10％番茄汁为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的10～20％，控制pH值为6.5，在半连续培养装置中30℃连续培养16～24小时，搅拌速度是200～250rpm，不通气发酵。

②乳酸乳球菌：以12％脱脂奶+蛋白水解酶为优化培养基，以5～10％麦芽汁+1～3％酵母粉+15～20mg/L Vc为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的10～20％，控制pH值为6.0，在半连续培养装置中32℃连续培养16～24小时，搅拌速度是200～250rpm，不通气发酵。

③肠膜明串珠菌：以蛋白胨0.5％+酵母膏0.5％+葡萄糖1％+柠檬酸钠0.15％+磷酸二氢钾0.1％为优化培养基，以0.005～0.11％Mg²⁺+0.005～0.01％Mn²⁺+3～5％酵母粉为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的5～10％，控制pH值为6.5，在半连续培养装置中32℃连续培养16～24小时，搅拌速度200～250rpm，通气量为1～2vol/vol/min。

④嗜酸乳杆菌：以12％脱脂奶+蛋白水解酶为优化培养基，以3～5％麦芽汁+3～5％酵母粉+15～20％番茄汁为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的10～20％，控制pH值为6.5，在半连续培养装置中35℃连续培养12～14小时，搅拌速度200～250rpm，通气量为1～2vol/vol/min发酵。

⑤干酪乳杆菌：以12％脱脂奶+蛋白水解酶为优化培养基，以5～10％麦芽汁+2～3％酵母粉+5～15％番茄汁为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的10～20％，pH值为6.5，在半连续培养装置中30℃连续培养16-24小时，搅拌速度200～250rpm，不通气发酵。