[发明专利]一种复合菌种发酵剂及其制备方法

权利要求书

1.一种复合菌种发酵剂，其特征在于它主要是由下列等量重量比原料制成：德氏乳杆菌保加利亚亚种、乳酸乳球菌、肠膜明串珠菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、克鲁维酵母、酿酒酵母，进行高密度培养后真空冷冻干燥，制成直投式单菌发酵剂再以等量细胞数目复合成复合菌种发酵剂。

2.根据权利要求1所述的一种复合菌种发酵剂的制备方法如下：

(1)对菌种德氏乳杆菌保加利亚亚种、乳酸乳球菌、肠膜明串珠菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、克鲁维酵母和酒香酵母，进行高密度培养，方法和步骤如下；各菌以3～5％培养基的量接种到优化培养基中，全自动发酵罐培养，流加无菌30％Na₂CO₃溶液控制发酵过程中的pH值，培养3～6小时后添加培养基量的0.1～20％增殖因子，培养3～6小时后流加相同体积的优化培养基继续培养，继续培养4～10小时后收集发酵液；

(2)对各菌种培养基再分别发酵；

①德氏乳杆菌保加利亚亚种：以12％脱脂奶+蛋白水解酶为优化培养基，以3～5％麦芽汁+3～5％酵母粉+5～10％番茄汁为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的10～20％，控制pH值为6.5，在半连续培养装置中30℃连续培养16～24小时，搅拌速度是200～250rpm，不通气发酵；

②乳酸乳球菌：以12％脱脂奶+蛋白水解酶为优化培养基，以5～10％麦芽汁+1～3％酵母粉+15～20mg/L Vc为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的10～20％，控制pH值为6.0，在半连续培养装置中32℃连续培养16～24小时，搅拌速度是200～250rpm，不通气发酵；

③肠膜明串珠菌：以蛋白胨0.5％+酵母膏0.5％+葡萄糖1％+柠檬酸钠0.15％+磷酸二氢钾0.1％为优化培养基，以0.005～0.11％Mg²⁺+0.005～0.01％Mn²⁺+3～5％酵母粉为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的5～10％，控制pH值为6.5，在半连续培养装置中32℃连续培养16～24小时，搅拌速度200～250rpm，通气量为1～2vol/vol/min；

④嗜酸乳杆菌：以12％脱脂奶+蛋白水解酶为优化培养基，以3～5％麦芽汁+3～5％酵母粉+15～20％番茄汁为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的10～20％，控制pH值为6.5，在半连续培养装置中35℃连续培养12～14小时，搅拌速度200～250rpm，通气量为1～2vol/vol/min发酵；

⑤干酪乳杆菌：以12％脱脂奶+蛋白水解酶为优化培养基，以5～10％麦芽汁+2～3％酵母粉+5～15％番茄汁为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的10～20％，pH值为6.5，在半连续培养装置中30℃连续培养16-24小时，搅拌速度200～250rpm，不通气发酵；

⑥克鲁维酵母：以2％酵母膏+1％蛋白胨+2％葡萄糖+0.1％KH₂PO₄为优化培养基，以0.15～0.35mg/mL Zn²⁺+45～60μg/mL生物素+45～60μg/mL肌醇为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的0.30～1％，控制pH值为6.5，在半连续培养装置中28℃连续培养16～24小时，搅拌速度是280～300rpm，通氧气量为10～20vol/vol/min发酵；

⑦酒香酵母：以2％酵母膏+1％蛋白胨+2％葡萄糖+0.1％KH₂PO₄为优化培养基，以0.25～0.35mg/mL Zn²⁺+60～80μg/mL生物素+35～55μg/mL肌醇为增殖因子，增殖因子添加量为培养基的0.25～1％，控制pH值为6.5，在半连续培养装置中28℃连续培养16～24小时，搅拌速度是250～280rpm，通氧气量为10～20vol/vol/min发酵；

(3)分别将以上各单菌发酵液在0～5℃条件下，转速为8000～15000转/分钟由高速冷冻离心机进行处理，离心后的浓缩菌体在无菌条件下加入细胞保护剂，各种浓缩菌体加入如下细胞的保护剂；

(4)将以上各单菌分别冻干：在-60～-40℃预冻24小时后真空冷冻，冷冻干燥温度-60℃，真空度为3～6pa，真空冷冻干燥24～36小时得到单菌冻干制品，各单菌冻干制品等细胞数目均匀混合后用锡箔密封真空包装即为复合菌种发酵剂成品。

3.根据权利要求2所述的一种复合菌种发酵剂的制备方法，其特征在于：所述的细胞保护剂由如下表组成：