[发明专利]登革病毒IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种酶联免疫诊断试剂盒，尤其是涉及一种登革病毒 抗体酶联免疫诊断试剂盒。

背景技术

登革热(Dengue Fever，DF)是由4个血清型登革病毒(Dengue Virus，DV)引起的急 性蚊媒传染病，主要通过埃及伊蚊或白纹伊蚊叮咬传播。登革病毒属于黄病毒科 (Flaviviridae)，黄病毒属(Flavivirus)。DF是分布最广，发病最多，危害较大的一种虫媒 病毒性疾病，广泛流行于全球热带和亚热带的非洲、美洲、东南亚和西太平洋区的100多 个国家和地区。据WHO估计全球约有25亿人口的健康受到威胁，每年有5000万人感染 登革病毒。随着全球气候变暖日趋严重，登革热地理分布上有蔓延的趋势，发病率和疫情 的严重程度也有所增加，登革热已成为全球性的严重公共卫生问题。

登革热在我国经过了30多年静止期后，1978年广东佛山突然发生流行，自此，登革 热一直是广东省重点防治的传染病。登革热疫情来势急，扩散快，不容易控制，对人民的 生命健康产生巨大威胁、对地方经济发展产生极大影响，因而成为一项重大的公共卫生问 题。登革热疑似病例的尽快确诊可帮助及早发现疫情，尽快采取措施，在最小范围控制疫 情，因而把损失减到最少。目前我国对登革热的实验室诊断主要依靠进口的酶联免疫试剂， 其价格昂贵，在基层医院及市、县级疾控中心难于普及，另外，进口试剂采购到货时间长， 实验室有时未能及时拿到试剂，而延误诊断。首发病人往往由于误诊，没有及时采取有效 措施，而导致登革热疫情蔓延。每宗疫情在其发现时已陷入十分紧张和被动的局面，进而 花费巨大的人力物力去控制。因此，开发出简便、快速、经济、适宜于基层单位推广使用 的登革热诊断试剂成为登革热疫情控制中急需解决的难题。

人感染了登革病毒后，一般经过3～10天(通常4～5天)的潜伏期后，受感染者会 出现以发热、疼痛为主要症状的登革热，同时，机体的免疫系统会产生一系列的免疫应答 反应，初次感染登革病毒，机体产生抗体的速度较慢，滴度也较低，IgM为最初应答的抗 体。IgG在发病的第一周末才出现，滴度很低，上升速度也慢。根据泛美卫生组织标准， 到发病的第五天，80％可查到检测水平的IgM，发病的第6-10天，93-99％可查到检测水平 的IgM，IgM可持续存在90天以上。

发明内容

本发明的目的在于提供一种登革病毒IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒，通过检测血清中 登革病毒IgM抗体，可对初次感染登革热的病人进行早期诊断。

本发明所述的一种登革病毒IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒，包括酶标记板、阴性对照 血清、阳性对照血清、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物显色液、终止液、封板 胶，所述酶标记物包含羊抗人IgM-HRP，即羊抗人IgM-辣根过氧化物酶；所述酶标记板 上的包被抗原为基因工程重组表达的登革病毒包膜蛋白特异性抗原，所述抗原包括：氨基 酸序列为SEQ ID No.1的重组1型登革病毒包膜蛋白特异性抗原；氨基酸序列为SEQ ID No.3的重组2型登革病毒包膜蛋白特异性抗原；氨基酸序列为SEQ ID No.5的重组3型登 革病毒包膜蛋白特异性抗原；氨基酸序列为SEQ ID No.7的重组4型登革病毒包膜蛋白特 异性抗原。

所述重组1型登革病毒包膜蛋白特异性抗原是由SEQ IDNo.2的DNA序列所编码的； 所述重组2型登革病毒包膜蛋白特异性抗原是由SEQ ID No.4的DNA序列所编码的；所 述重组3型登革病毒包膜蛋白特异性抗原是由SEQ ID No.6的DNA序列所编码的；所述 重组4型登革病毒包膜蛋白特异性抗原是由SEQ IDNo.8的DNA序列所编码的。

所述的阳性对照血清是在含20％山羊血清和0.02％叠氮钠的10mM的pH7.4的PBS中， 加入确定浓度的阳性血清制成，阳性对照的A值应大于1.5；阴性对照血清是在含20％山 羊血清和0.02％叠氮钠的10mM的pH7.4的PBS中，按5％的比例加入混合好的阴性血清 制成，阴性对照的A值应小于0.1。