[发明专利]登革病毒IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒

权利要求书

1.一种登革病毒IgM抗体酶联免疫诊断试剂盒，包括酶标记板、阴性对照血清、阳性对照血清、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物显色液、终止液、封板胶，其特征在于：

所述酶标记物包含羊抗人IgM –HRP，即羊抗人IgM –辣根过氧化物酶；

所述酶标记板上的包被抗原为基因工程重组表达的登革病毒包膜蛋白特异性抗原，所述抗原包括：氨基酸序列为SEQ ID No.1的重组1型登革病毒包膜蛋白特异性抗原；氨基酸序列为SEQ ID No.3的重组2型登革病毒包膜蛋白特异性抗原；氨基酸序列为SEQ ID No.5的重组3型登革病毒包膜蛋白特异性抗原；以及氨基酸序列为SEQ ID No.7的重组4型登革病毒包膜蛋白特异性抗原；

所述的阳性对照血清是在含20%山羊血清和0.02%叠氮钠的10mM的pH7.4的PBS中，加入确定浓度的阳性血清制成，阳性对照的OD值应大于1.5；

阴性对照血清是在含20%山羊血清和0.02%叠氮钠的10mM的pH7.4的PBS中，按5%的比例加入混合好的阴性血清制成，阴性对照的OD值应小于0.1。

2. 根据权利要求1所述的登革病毒抗体酶联免疫诊断试剂盒，其特征在于：

所述重组1型登革病毒包膜蛋白特异性抗原是由SEQ ID No.2的DNA序列所编码的；

所述重组2型登革病毒包膜蛋白特异性抗原是由SEQ ID No.4的DNA序列所编码的；

所述重组3型登革病毒包膜蛋白特异性抗原是由SEQ ID No.6的DNA序列所编码的；

所述重组4型登革病毒包膜蛋白特异性抗原是由SEQ ID No.8的DNA序列所编码的。

3. 根据权利要求1所述的登革病毒抗体酶联免疫诊断试剂盒，其特征在于：所述酶标记板的制备方法是：将所述的基因工程重组表达的登革病毒包膜蛋白特异性抗原按确定的浓度用0.05M的pH9.6的CB即碳酸盐缓冲液稀释后，按0.1ml/孔包被到微孔板内，在2℃～8℃吸附24～26小时后，用10mM PBST即吐温磷酸缓冲液按0.25ml/孔洗板，再用封闭液按0.15ml/孔在2℃～8℃封闭18～20小时，弃除多余的封闭液，经真空干燥处理后用铝膜袋密封，置2～8℃保存。

4. 根据权利要求3所述的登革病毒抗体酶联免疫诊断试剂盒，其特征在于：所述的封闭液的组成为：含20%山羊血清和0.02%叠氮钠的10mM的pH7.4的PBS即磷酸缓冲液。

5. 根据权利要求1所述的登革病毒抗体酶联免疫诊断试剂盒，其特征在于：所述的所述酶标记物是用酶标稀释液按工作浓度配制的羊抗人IgM –HRP工作液，所述的酶标稀释液的组成为：pH7.4的 10mM 磷酸缓冲液即PBS，其中含10%山羊血清、0.2%吐温-20和0.02%叠氮钠。