[发明专利]具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的酶解产物及其应用无效
| 申请号: | 200710011681.1 | 申请日: | 2007-06-13 |
| 公开(公告)号: | CN101323640A | 公开(公告)日: | 2008-12-17 |
| 发明(设计)人: | 杜昱光;王佳培;徐俊光;白雪芳 | 申请(专利权)人: | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号: | C07K14/435 | 分类号: | C07K14/435;C12P21/06;A61K38/17;A61P3/10;A23L1/305 |
| 代理公司: | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 | 代理人: | 马驰;周秀梅 |
| 地址: | 116023*** | 国省代码: | 辽宁;21 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 具有 抑制 葡萄 糖苷酶 活性 产物 及其 应用 | ||
1.一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的酶解产物,其特征在于:其通过胃 蛋白酶酶解牡蛎可溶性蛋白获得;
所述牡蛎可溶性蛋白按如下过程获取:
将新鲜牡蛎去壳、除内脏,将余下的白色肌肉、鳃和体液用匀浆机在低温 状态下切碎后,将其加到等体积的PH=6-8的PBS缓冲液中,充分搅拌;于0-8℃ 条件下,静置2-10小时后,离心;取上清液,加入硫酸铵,并使其最终浓度达 到75-100%,并在0-8℃条件下,静置2-10小时,离心;将沉淀溶于PH=6-8 的PBS缓冲液中,装入透析袋,透析袋的截留分子量MW为8000-12000道尔 顿,自来水流水透析12-36小时,再用去离子水流水透析12-36小时,然后将 透析袋中的内容物真空冷冻干燥,得到牡蛎可溶蛋白;
所述胃蛋白酶酶解牡蛎可溶性蛋白的操作过程如下:
将牡蛎可溶性蛋白溶于PH=2-4的磷酸缓冲液中,缓冲体系中蛋白的质量 体积浓度为1-5%,加入胃蛋白酶,酶与底物牡蛎可溶蛋白的质量比为1∶ 1-1000,在25-40℃条件下酶解1-48小时;所得酶解液加热至80-100℃,并保 持5-30分钟,使蛋白酶失活;之后调节酶解液pH=6-8,离心,经超滤膜过滤, 超滤膜的截留分子量MW为8000-12000道尔顿,收集透过超滤膜的小分子组 分,其即为具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的酶解产物;
将透过超滤膜的小分子组分经Sephadex LH-20柱进行层析分离,用体积浓 度20-40%的甲醇溶液洗脱,柱温为室温,检测波长为280纳米,按时间收集; 收集具有较强α-葡萄糖苷酶抑制活性的组分,对酶解产物进一步纯化。
2.按照权利要求1所述酶解产物,其特征在于:所述磷酸缓冲液中盐的 浓度为0.01-0.2mol/L。
3.一种权利要求1所述的酶解产物及其盐类在制备治疗和预防高血糖药 物中的应用。
4.按照权利要求3所述的酶解产物及其盐类的应用,其特征在于:所述 药物为酶解产物及其盐类与充填剂所形成的散剂、颗粒剂、片剂、胶囊、水溶 液、悬浮液、乳化液、喷剂或粉剂,它们具有α-葡萄糖苷酶抑制活性。
5.按照权利要求3所述的酶解产物及其盐类的应用,其特征在于:所述 药物添加到各种食品当中,作为控制血糖保健食品。
6.按照权利要求3所述的酶解产物及其盐类的应用,其特征在于:所述 盐类为酶解产物与酸反应产生的盐类、与金属离子形成的盐类或与氨基乙醇、 三乙氨或二环乙氨形成的胺类盐。
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