[发明专利]一种检测土壤反硝化酶活性的分析方法

权利要求书

1. 一种检测土壤中反硝化酶活性的分析方法，其特征在于：

1)称取0.5-1g过1-1.5mm筛的土壤风干样品n份分别装入n支试管中，n≥2，向其中n-1支试管中加入5-15mL 5g/L-15g/L的底物KNO₃溶液，另1支试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；然后向试管中分别加入1-2mL重量浓度0.5％-1％的葡萄糖溶液作为氢的供体，用蒸馏水补充至15-20mL，摇匀，塞上不透气的橡胶塞后37℃恒温培养48h；同时作试剂空白对照；

2)培养结束后，3900-4100r/min离心20-25min；

3)用紫外分光光度法分别测定吸光度A₂₂₀，A₂₇₅；

4)求出校正吸光度A＝A₂₂₀-A₂₇₅；

5)制作工作标准曲线，以硝酸根溶液的系列浓度和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b；

6)根据吸光值A和斜率b，计算所测定溶液中硝酸根的浓度S，S＝A*b；

7)计算样品中硝酸根浓度；

8)计算反硝化酶活性：

计算公式为：[S₁-(S₂-S₃)*V/1000]/W.T＝mgNO₃^--N/g土·48h

式中：S₁为试剂空白中的NO₃^--N的含量(mg)，S₂为样品中的NO₃^--N的含量(mg/L)，S₃为样品对照中的NO₃^--N的含量(mg/L)，V为浸提液总体积(mL)，W为称土样重(g)，1000为单位转换系数，T土样培养时间(h)。

2. 根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：对于酸性土样品，分析前应调解其pH为7-8.5，可采用加入碳酸钙的方法调解，每支试管中分别加入15-25mgCaCO₃，混匀向其中n-1支试管中加入5-15mL 5g/L-15g/L的底物KNO₃溶液，另1支试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照。

3. 根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：制作工作标准曲线过程，吸取硝酸根标准溶液0mL，0.5mL，1mL，2mL，3mL，4mL，5mL分别放于100mL容量瓶中用蒸馏水定容，用紫外分光光度计测其吸光度A’，以硝酸根溶液的系列浓度0mg/L，0.5mg/L，1mg/L，2mg/L，3mg/L，4mg/L，5mg/L和测定的吸光值A’制作工作标准曲线，得到斜率b。