[发明专利]液相半乳糖氧化酶希夫测定法

权利要求书

1.一种检测受试者癌或癌前病变的方法，其中，测定受试者的样品以确定与 癌或癌前细胞相关样品中糖类标记物的存在，所述方法包括以下步骤：

(a)混合样品与氧化剂，所述氧化剂能将糖类标记物上敏感的C-6羟基氧化为 醛；

(b)添加醛检测剂到混合物中，在醛的存在下发生比色变化；

(c)检测液相系统中的比色变化，其中，所述醛检测剂引起的比色变化指示了 与癌或癌前细胞相关的糖类标记物的存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氧化剂是半乳糖氧化酶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述糖类标记物包括：D- 半乳糖[Gal]、N-乙酰-D-半乳糖胺[GalNAc]、D-Gal-β-[1→3]-N-乙酰-D-半乳糖胺 [GalGalNAc]、Fuc-α-1→2-Gal-β-(1→4)-Fuc-α-1→3-GlcNAc、Fuc-α-1→2-Gal-β-(1 →4)-Fuc-α-1→3-GlcNAc-β-(1→3)-Gal-β-(1→4)-GlcNAc、和Fuc-α-1→2-Gal-β- (1→4)-Fuc-α-1→3-GlcNAc-β-(1→3)-Gal-β-(1→4)-Fuc-α-1→3-GlcNAc。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述醛检测剂是碱 性品红。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述碱性品红是希夫试剂。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，通过确定约 530-570nm波长下样品的吸光度，分光光度法定量比色变化。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，通过确定约550nm 波长下样品的吸光度，分光光度法定量比色变化。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品与氧化剂 混合之前先被液化。

9.根据权利要求8中所述的方法，其特征在于，用还原剂液化样品。

10.根据权利要求9中所述方法，其特征在于，所述还原剂是N-乙酰基半胱氨 酸、β-巯基乙醇，二硫苏糖醇或三(2-羧乙基)膦。

11.根据权利要求8中所述方法，其特征在于，用机械降解或高频振动的方法 液化样品。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品与氧化 剂混合之前，先将细胞物质和颗粒从样品中除去。

13.根据权利要求12中所述的方法，其特征在于，通过离心和过滤的方法将 细胞物质和颗粒从样品中除去。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其特征在于，样品从样本采集 装置中提取。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其特征在于，使用阳性对照。

16.根据权利要求15中所述的方法，其特征在于，所述阳性对照是半乳甘露 聚糖。

17.一种检测受试者癌或癌前病变的试剂盒，所述试剂盒包括氧化剂和醛检测 剂，以及执行根据权利要求1-16中任一项所述方法的说明书。

18.根据权利要求17所述的试剂盒，其特征在于，所述氧化剂是半乳糖氧化 酶。

19.根据权利要求17或18所述的试剂盒，其特征在于，所述醛检测剂是存储 稳定的碱性品红。

20.根据权利要求19所述的试剂盒，其特征在于，所述碱性品红是希夫试剂。

21.根据权利要求17-20中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包括滤器，以 从样品中去除细胞物质和颗粒。

22.根据权利要求17-21中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包括液化样品 的还原剂。