[发明专利]一种融合蛋白的组成及其分离方法

权利要求书

1.一种包含以下序列的肽接头：

X1-X2-Ser-Pro-X3-X4-X5

其中：

X1是两个或两个以上彼此相同或不同的氨基酸残基；

X2是疏水氨基酸残基；

X3是精氨酸或赖氨酸；

X4是丙氨酸或甘氨酸；以及

X5是一种非酸性氨基酸。

2.如权利要求1所述的肽接头，其中X1是4个或4个以上的氨基酸残基。

3.如权利要求1所述的肽接头，其中X1是不超过10个的氨基酸残基。

4.如权利要求1所述的肽接头，其中X1包含脯氨酸和精氨酸。

5.如权利要求1所述的肽接头，其中X2选自由甘氨酸，丙氨酸，脯氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸以及色氨酸所组成的群。

6.如权利要求5所述的肽接头，其中X2是甘氨酸。

7.如权利要求1所述的肽接头，其中X5选自由丝氨酸，丙氨酸，天门冬酰胺，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸以及色氨酸所组成的群。

8.如权利要求7所述的肽接头，其中X5是丝氨酸。

9.如权利要求1所述的肽接头，其特征在于，包含序列Pro-Arg-Gly-Ser-Pro-Arg-Ala-Ser(SEQ ID NO：7)。

10.如权利要求1所述的肽接头，其特征在于，包含序列Leu-Val-Pro-Arg-Gly-Ser-Pro-Arg-Ala-Ser(SEQ ID NO：8)。

11.一种融合蛋白，其包含个目标蛋白，融合伴侣以及插在两者之间的肽接头；所述肽接头包含以下序列：

X1-X2-Ser-Pro-X3-X4-X5

其中：

X1是两个或两个以上彼此相同或不同的氨基酸残基；

X2是疏水氨基酸残基；

X3是精氨酸或赖氨酸；

X4是丙氨酸或甘氨酸；以及

X5是一种非酸性氨基酸。

12.如权利要求11所述的融合蛋白，其中，所述的目标蛋白选自由白介素(IL)-11，胸腺肽β4，胸腺肽α1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-10，IL-13，IL-15，IL-18，蛋白酶激活受体1(PAR1)，PAR3，PAR4，RANTES，基质细胞衍生因子-1α，单核细胞趋化蛋白，干细胞因子，FLT-3L，甲状旁腺激素，血小板生成素，表皮细胞生长因子，碱性成纤维细胞生长因子，胰岛素样生长因子，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，粒细胞集落刺激因子，巨噬细胞集落刺激因子，血小板源生长因子，转化生长因子(TGF)-β1，肿瘤坏死因子(TNF)-α，干扰素(IFN)-α，IFN-β，IFN-γ，肝细胞生长因子，血管内皮生长因子以及免疫球蛋白重链所组成的群。

13.如权利要求12所述的融合蛋白，其中所述的目标蛋白选自由人IL 11，胸腺肽β4，IL-6和PAR4所组成的群。

14.如权利要求12所述的融合蛋白，其中所述的目标蛋白为人IL 11。

15.如权利要求11所述的融合蛋白，其中所述的融合伴侣是一种亲和肽。

16.如权利要求15所述的融合蛋白，其中所述的融合伴侣选自由谷胱甘肽s转移酶(GST)，麦芽糖结合蛋白(MBP)，六聚组氨酸，T7多肽，泛素，Flag多肽，c-myc多肽，聚精氨酸，聚半胱氨酸，聚苯丙氨酸，BTag，半乳糖结合域，纤维素结合域(CBD)，硫氧还蛋白，匍萄球菌蛋白A，链球菌蛋白G，钙调蛋白，β-半乳糖苷酶，氯霉素乙酰转移酶，S-多肽，链霉亲和素，His-标签和Strep-标签所组成的群。

17.如权利要求16所述的融合蛋白，其中所述的融合伴侣是GST。

18.一种从权利从要求11所述的融合蛋白分离目标蛋白的方法，包括使融合蛋白与足够量的凝血酶接触从而引起肽接头的裂解。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述的融合蛋白在肽接头的X3和X4间断裂。