[发明专利]一种纤维化疾病的基因治疗药物

说明书

技术领域

本发明属于基因治疗领域。具体地讲，本发明公布了一种治疗纤维化疾病的基因药物，及其在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途。

背景技术

肝脏是人体最重要的脏器之一，具有消化、解毒、物质转化、能量存储等多种生理功能，但肝脏也是最容易受到损伤的脏器之一，化学物质、细菌、病毒、酒精等各种因素都可能造成肝脏的慢性损伤，而肝纤维化是各种慢性肝损伤共同的病理改变，肝纤维化形成和发展的机理较为复杂，多种因素互为因果。正是由于肝纤维化的复杂机制使得肝纤维化的治疗进展缓慢。抑制、阻止并逆转肝纤维化是治疗各种慢性肝病的中心环节。

虽然肝纤维化是多种因素参与并长期相互作用的结果，其形成机制较为复杂，但各种细胞因子形成的细胞因子网络在肝纤维化的发生、发展过程中发挥了重要作用，因此，有效调控细胞因子网络将有可能减缓或逆转肝纤维化进程。目前，肝纤维化的治疗主要从以下几方面入手，即抑制肝星形细胞的活化、抑制细胞外基质的合成和分泌、促进细胞外基质的降解、抑制炎症反应和促进肝细胞再生等。

肝细胞生成素(hepatopoietin，HPO)是一种新型肝再生因子，又名肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration，ALR)、肝刺激物(hepatic stimulating substance，HSS)等。肝细胞生成素参与了肝脏的损伤修复，肝细胞生成素蛋白能够刺激受损肝脏中肝细胞增殖，抑制肝纤维化。

与一般的细胞因子不同，肝细胞生成素是一种不含信号肽的细胞因子，有研究表明，原代培养的肝细胞和肝癌细胞能够分泌肝细胞生成素(Gandhi CR et al.A fresh look at augmenterof liver regeneration in rats.Hepatology 1999，29(5)：1435-45；Li Y et al.Hepatopoietin acts as anautocrine growth factor in hepatoma cells.DNA Cell Biol 2001，20(12)：791-5)，但由于肝细胞生成素本身缺乏信号肽序列，所以，其从细胞中的分泌出来的效率很低，这可能与肝细胞生成素在细胞内、外均有功能相适应。如果肝细胞生成素含有信号肽序列，则其在细胞内合成后将会被输送到内质网中，通过内质网-高尔基体途径被分泌到细胞外，而将不能留在细胞内发挥其胞内功能。

肝细胞生成素蛋白具有抑制肝纤维化的作用，所以，有研究利用肝细胞生成素真核表达载体对肝纤维化进行基因治疗(李青等，肝再生增强因子重组质粒对肝纤维化大鼠的实验治疗作用。第三军医大学学报2005，27(8)：760-763；Zhang LM，et al.Effect ofnaked eukaryoticexpression plasmid encoding rat augmenter of liver regeneration on acute hepatic injury andhepatic failure in rats.World J Gastroenterol 2005，11(24)：3680-3685；代文杰等，人肝再生增强因子基因转导对大鼠肝纤维化的保护作用，中华肝胆外科杂志2003，9(4)：210-213)。虽然取得了一定的治疗效果，但结果并不理想，分析其原因主要在于他们的研究中是将肝细胞生成素基因直接克隆到非分泌性表达载体中，而由于肝细胞生成素本身无信号肽序列，所以，他们构建的肝细胞生成素表达载体虽然能够在靶细胞中表达肝细胞生成素，但表达的肝细胞生成素主要存在于细胞浆中，分泌到细胞外的很少，导致血液中肝细胞生成素达不到有效的治疗浓度，所以，治疗效果不理想。

发明内容

本发明公开了一种治疗纤维化疾病的基因药物，该基因药物的特点是治疗用基因为肝细胞生成素基因，且在肝细胞生成素基因的前面添加了信号肽基因，信号肽基因和肝细胞生成素基因形成一个融合基因，将该融合基因克隆到表达载体中，该重组表达载体能够编码含有信号肽的肝细胞生成素。将该重组载体注射到动物体内，使该重组载体进入细胞，在细胞内表达含有信号肽的肝细胞生成素，在信号肽的引导下，合成的肝细胞生成素能够从动物细胞中分泌出来，通过血液循环到达肝脏、肺、肾脏等病变部位，发挥其预防或治疗纤维化疾病的作用。