[发明专利]抗病毒基因MxA荧光定量试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种抗病毒基因MxA荧光定量试剂盒，包括：MxA和管家基因GAPDH扩增引物，dNTP，用于PCR反应的DNA聚合酶及其缓冲液的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

MxA：正向引物：-2040F：5’GTCCAGCTCGGCAACAGACT3’，

反向引物：-2157R：5’CATGAAGAACTGGATGATCA AAGG3’，

探针：-2093T：5’FAM-CCTATCACCAGGAGGCCAGCAAG CG3’TARMA。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

GAPDH：正向引物：-81F：5’GAAGGTGAAGGTCGGAGTC3’，

反向引物：-287R：5’GAAGATG GTGATGGGATTTC3’，

探针：-258T：5’FAM-CAAGCTTCCCGTTC TCAGCC3’TARMA。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的PCR缓冲液中含有1X Buffer，2mM MgCl₂，200μM dNTP，1U Taq酶，正反向引物均500nM，探针为200nM。

5.一种利用权利要求1所述的抗病毒基因MxA荧光定量试剂盒检测方法，包括以下步骤：

(1)、采集外周血单个核细胞PBMC；

(2)、干扰素刺激PBMC细胞；

(3)、构建含MxA和管家基因GAPDH目的基因片段的TA克隆；

(4)、采用实时荧光PCR检测MxA mRNA的诱导表达；

(5)、根据标准曲线和域值，判断样本的Ct值。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)中体外使用10000IU/ml干扰素刺激100万个PBMC。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：步骤(4)中在ABI-RPISM7000进行实时荧光PCR，PCR扩增反应为58℃2min，95℃15Sec，59℃45Sec，40个循环。