[发明专利]使用密码子扫描规则的DNA芯片

权利要求书

1.使用密码子扫描规则的寡核苷酸探针的制备方法，包括以下步骤：

(i)选择待调查突变密码子；和

(ii)制备探针，其应确保待调查突变密码子位于由至少7个核苷酸组成的所述寡核苷酸探针最中心的位置，其余的序列与正常个体中的保持相同，并且，将胺基团与探针的3’末端连接。

2.权利要求1的制备寡核苷酸探针的方法，其中，以以下方式设计一组共4个探针，即各探针在所述待调查密码子的第一个核苷酸的位置上具有A、G、T或C，且所述密码子的其余2个核苷酸与正常个体中的保持相同，再以以下方式设计另一组共4个探针，即各探针在所述待调查密码子的第二个核苷酸的位置上具有A、G、T或C，且密码子的其余2个核苷酸与正常个体中的保持相同，再以以下方式设计另一组共4个探针，即各探针在所述待调查密码子的第三个核苷酸的位置上具有A、G、T或C，且密码子的其余2个核苷酸与正常个体中的保持相同，最终，得到12种针对待调查突变密码子的探针。

3.制备DNA芯片的方法，包括将按权利要求1的方法制备的探针定位到醛包被的固相表面上的步骤，以将所述探针固定到固相表面上。

4.权利要求3的制备DNA芯片的方法，其中所述固定通过探针中的胺基团与包被在固相表面上的醛的结合反应来完成。

5.权利要求4的制备DNA芯片的方法，其中所述结合反应在70-90％湿度下进行4-8小时。

6.权利要求3的制备DNA芯片的方法，其中所述固相材料是玻璃板。

7.一种DNA芯片，其是通过权利要求3的方法制备的。

8.使用权利要求7的DNA芯片检测遗传突变的方法，包括以下步骤：

(i)使用待调查DNA和用荧光物质标记的引物进行PCR，以获得用荧光物质标记的样品DNA；

(ii)在10-37℃下使样品DNA与DNA芯片结合3-13小时，然后洗涤DNA芯片；和，

(iii)测量在经洗涤的DNA芯片上残留的荧光信号。

9.权利要求8的使用DNA芯片检测遗传突变的方法，其中，所述的样品DNA与DNA芯片的结合在3-10X结合缓冲液(SSPE：0.15MNaCl、10mM NaH₂PO₄·H₂O、1mM EDTA，pH7.4)的条件下进行。

10.权利要求8的使用DNA芯片检测遗传突变的方法，其中，所述DNA芯片用第一洗涤溶液(0.45M NaCl、30mM NaH₂PO₄·H₂O、3mM EDTA，pH7.4)洗涤5分钟，再用第二洗涤溶液(0.3M NaCl、20mMNaH₂PO₄·H₂O、2mM EDTA，pH7.4)洗涤5分钟。