[发明专利]卵巢癌的检测方法和试剂盒

说明书

本发明涉及细胞遗传学领域。更具体的，本发明涉及鉴别真核起始抑制5A2(eIF-5A2)的扩增，该扩增是多种癌症的良好诊断指示物。此外，本发明还提供了对eIF-5A2特异的探针和试剂盒。

卵巢癌是妇女泌尿生殖癌症中主要的导致死亡的病因，约1％美国妇女在其一生中受到卵巢癌的影响。如果没有被早期诊断的话，卵巢癌的预后很差，五年生存率不到10％。与其他一些实体瘤相比，人们至今对卵巢癌的分子发病机理及其发展过程了解甚少。

染色体异常通常与遗传疾病、退化性疾病和癌症相关。具体地，整个染色体或染色体片断拷贝的缺失或复制，以及基因组特定区域的更高等级的扩增，通常发生于癌症中。事实上，含有原癌基因和肿瘤抑制基因的DNA序列的扩增和缺失经常是肿瘤发生所特有的。很明显，对扩增和缺失区域的鉴定以及对相关基因的克隆，对于研究肿瘤发生和开发癌症诊断技术都是至关重要的。

检测扩增或缺失的染色体区域，通常通过细胞遗传学进行。因为DNA经复杂折叠形成染色体，因此细胞遗传技术的分辨率被局限于大于约10MB的区域；这几乎是Giemsa染色的染色体中条带的宽度。在复杂的具有多个转座和其他遗传变化的核型中传统细胞遗传分析方法的用途很有限，因为缺乏核型信息或难以被解释。此外常规细胞遗传学条带分析法是费时费力的，而且经常十分困难或不可能。

最近，克隆探针已用于通过Southern印迹法评估给定DNA序列在染色体中的数量。即使在基因组是高度重排，以致于消除有用的核型信息的情况下，该方法也是有效的。然而Southern印迹法仅仅给出了有关DNA序列拷贝数的大致估算并不能给出该序列在染色体中位置的任何信息。

比较染色体杂交法(CGH)是更新的一种鉴别扩增/缺失序列存在与否及其位置的方法。与Southern印迹法一样，CGH可揭示扩增和缺失，而不受基因组重排的影响。此外，CGH提供了比Southern印迹法更定量的对拷贝数的估计，而且还可以提供扩增或缺失序列在正常染色体中的位置信息。

最近，用比较基因组杂交技术(CGH)，在原发性卵巢癌中鉴别出了3q25-qter中的一个频繁扩增的区域。最小的重迭扩增区被定位于3q26。

鉴别出经常扩增的染色体区域以及所述区域中相应癌基因，对于了解肿瘤发生的分子机理是绝对必要的。最近，编码磷脂酰肌醇3-激酶的催化亚基的PIK3CA，已被暗示是3q26区的候选癌基因(Shayesteh，L.，et al.，Nat.Genet.，21：99-102，1999)。因为在一些病例中仅有低水平的PIK3CA扩增，并且卵巢癌细胞系UACC-1598在3q26区含有高水平的双微体形式的扩增(Brooks，D.J.，etal.，Br.J.Cancer，74：1518-1525，1996)，所以在该区域可能还有另一癌基因。

因此，本领域迫切需要寻找与卵巢癌有关的癌基因，尤其是在3q26区中的癌基因。然而，在本申请之前，还没有报道并证实过其他与卵巢癌有关的癌基因。

在本发明的第一方面，提供了一种检测人染色体异常的方法，它包括步骤：

在探针与靶序列会形成稳定杂交复合体的条件下，将待测对象的染色体样品与含有一种或多种核酸探针的组合物接触，其中所述的探针含有全长eIF-5A2或其片段的核苷酸序列；和

检测所述的杂交复合体。

较佳地，所述的检测杂交复合体的步骤包括检测靶序列的拷贝数。

在本发明的一个实例中，所述的检测杂交复合体是通过检测荧光标记物。

在本发明的一个实例中，所述的染色体异常是扩增。

5.如权利要求1所述的方法，所述的全长eIF-5A2及其片段包括：DNA、cDNA和反义DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种检测癌症的试剂盒，它包括：

标记的核酸探针，该探针可特异性地结合于人eIF-5A2的核苷酸序列，且该核酸含有全长eIF-5A2及其片段的核苷酸序列。

较佳地，所述的试剂盒还含有对染色体3的端粒序列特异的参照探针。

在本发明的另一方面，提供了一种检测肿瘤或肿瘤易感性的方法，

将含有全长eIF-5A2或其片段的核苷酸序列的探针，与待测个体的DNA样品进行杂交；和

检测形成的杂合体数目是否高于正常对照，

其中形成的杂合体数目是否高于正常对照就表示该个体患有肿瘤或肿瘤易感性高于正常人群。

较佳地，所述的肿瘤选自下组：卵巢癌、鼻咽癌、前列腺癌和输卵管癌。