[发明专利]一种酰胺化重组多肽及其制备方法

权利要求书

1.一种核酸构建体，其中包括至少一种编码酰胺化酶的核酸序列和编码待酰胺化的目标多肽的核酸序列。

2.权利要求1所述的核酸构建体，其中所述待酰胺化的目标多肽为降钙素、催产素、加压素、促皮质释放激素、促甲状腺释放激素、神经激肽、咽侧体抑制素、Lem-KI、红色素浓缩激素、促黄体激素释放激素、白细胞焦激肽、胃泌素、色素分散激素、皮啡肽、铃蟾肽、胃泌素释放肽、神经调节肽、胰抑制素、芋螺毒素M1、胰抑素、蜂毒肽、麻蝇毒素1A、VIP、α-MSH、MIF-1。

3.权利要求1所述的核酸构建体，其中所述目标多肽为鲑鱼降钙素。

4.权利要求1所述的核酸构建体，其中所述的酰胺化酶为大鼠α-酰胺化酶。

5.一种含有权利要求1所述的核酸构建体的重组表达载体，其中所述表达载体还含有表达控制序列，包括启动子、增强子、终止序列。

6.一种含有权利要求5所述表达载体的原核表达宿主，其选自链霉菌属、芽孢杆菌属的菌株以及大肠杆菌。

7.权利要求6所述原核表达宿主，其为浅青紫链霉菌TK54、TK24、TK21、TK64或1326。

8.权利要求7所述的原核表达宿主，其中所述表达载体为来源于pIJ101的质粒或者是来源于pSGL1的质粒。

9.权利要求8所述的原核表达宿主，其中所述重组表达质粒为pIJ-mel-AE/mel-sCT。

10.一种制备酰胺化多肽的方法，其包括(1)用带有权利要求1中所述的核酸构建体之重组表达载体转化适当的原核宿主；(2)在有利于α-酰胺化酶以及目标多肽产生的条件下培养所得的原核表达宿主细胞，(3)从培养物中回收酰胺化目标多肽。

11.权利要求10的方法，其中所述待酰胺化的目标多肽为鲑鱼降钙素。

12.权利要求10的方法，其中所述原核宿主为浅青紫链霉菌TK54、TK24、TK21、TK64或1326。

13.权利要求10的方法，其中所述重组表达宿主中含有pIJ-mel-AE/mel-sCT。

14.一种制备酰胺化多肽的方法，其包括(a)用含有编码酰胺化酶的核酸序列的表达质粒以及相容性的含有编码待酰胺化的目标多肽的核酸序列之表达质粒共转化原核宿主细胞；(b)在有利于α-酰胺化酶以及目标多肽产生的条件下，培养所得原核表达宿主细胞；以及(c)从培养物中回收酰胺化目标多肽。

15.权利要求14的方法，其中所述待酰胺化的目标多肽为鲑鱼降钙素。

16.权利要求14的方法，其中所述原核宿主为浅青紫链霉菌TK54、TK24、TK21、TK64或1326。

17.权利要求14的方法，其中所述表达宿主含有pMS680及pSGLN-mel-AE。

18.一种制备酰胺化多肽的方法，其包括(a)分别用含有编码酰胺化酶的核酸序列的表达质粒以及含有编码待酰胺化的目标多肽的核酸序列之表达质粒转化两个独立的原核宿主细胞；(b)在有利于α-酰胺化酶以及目标多肽产生的条件下，共培养所得原核表达宿主细胞；以及(c)从培养物中回收酰胺化目标多肽。

19.权利要求18的方法，其中所述待酰胺化的目标多肽为鲑鱼降钙素。

20.权利要求18的方法，其中所述原核宿主各自独立地选自浅青紫链霉菌TK54、TK24、TK21、TK64或1326。

21.权利要求18的方法，其中所述两种表达宿主中分别含有pMS680或pSGLN-mel-AE。