[发明专利]使用不同的核苷酸混合物的DNA测序方法和用于该方法的试剂盒

权利要求书

1.一种采用双脱氧核苷酸介导的终止反应的DNA核苷酸序列分析方法，其特征在于包括：

1)制备下列反应混合物的步骤

其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比高于0.05的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；

其中包括ddATP与dATP的摩尔比高于0.058的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；

其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比高于0.1的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；和

其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比高于0.0033的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；

2)制备下列反应混合物的步骤

其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；

其中包括ddATP与dATP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；

其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；和

其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比低于0.02的核苷酸混合物的用于产生互补DNA片段的反应混合物；

3)分别向以上步骤1)和2)中制备的上述8种反应混合物中添加模板DNA和引物来产生互补DNA片段的步骤；

4)将步骤3)中获得的互补DNA片段按照ddNTP的种类分别进行混合并按分子量顺序对如此制备的各互补DNA片段的混合物进行分离的步骤；

5)通过识别如上分离的所述互补DNA片段的末端碱基来确定模板DNA核苷酸序列的步骤。

2.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中用于产生互补DNA片段的反应混合物是

其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比不低于0.05的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddATP与dATP的摩尔比不低于0.116的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比不低于0.2的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比不低于0.066的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比不高于0.01的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddATP与dATP的摩尔比不高于0.0116的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比不高于0.015的核苷酸混合物的反应混合物；和

其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比不高于0.0066的核苷酸混合物的反应混合物。

3.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中用于产生互补DNA片段的反应混合物是

其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比不低于0.15的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddATP与dATP的摩尔比不低于0.174的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比不低于0.3的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比不低于0.099的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比不高于0.005的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddATP与dATP的摩尔比不高于0.0058的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比不高于0.01的核苷酸混合物的反应混合物；和

其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比不高于0.0033的核苷酸混合物的反应混合物。

4.根据权利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中用于产生互补DNA片段的反应混合物还包括

其中包括ddGTP与dGTP的摩尔比为0.02-0.05的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddATP与dATP的摩尔比为0.02-0.058的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddTTP与dTTP的摩尔比为0.02-0.1的核苷酸混合物的反应混合物；

其中包括ddCTP与dCTP的摩尔比为0.02-0.033的核苷酸混合物的反应混合物。