本发明提供了一种抗菌肽RW‑P及其制作方法和应用,抗菌肽RW‑P的序列如SEQ ID No.2所示。制作方法如下:以简单的两种氨基酸为基本的氨基酸组成,以XXYY的序列形式重复三次得到α‑螺旋型抗菌肽RW,其中,X为精氨酸,Y为色氨酸。将RW抗菌肽第5位的精氨酸和第8位的色氨酸进行定点的氨基酸残基替代,引入脯氨酸,得到抗菌肽RW‑P。计算机结构预测和圆二色谱结构测定表明,RW为α‑螺旋结构,引入脯氨酸,RW‑P的螺旋含量降低。研究发现,RW‑P保持了RW的高抗菌活性,同时降低了细胞毒性,提高了细胞选择性。此方法为设计高效低度的抗菌肽应用于动物生产提供了理论依据。