本发明公开了马尾松PmAP2/ERF基因及其表达蛋白和应用,属于植物基因工程技术领域。本发明的马尾松PmAP2/ERF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以马尾松幼苗为材料,通过克隆得到马尾松PmAP2/ERF基因,在此基础上构建其植物表达载体pBI121‑PmAP2/ERF转入山新杨叶片中,得到转基因植株。
本发明提供一种在毕赤酵母中表达的抗菌肽及其制备方法和应用,其序列如序列表SEQ ID No.1所示,本发明根据PMAP‑36成熟区的氨基酸序列,设计出其反向平行的二聚体(PMAP‑36)2,利用基因工程方法人工合成(PMAP‑36)2的基因片段,在毕赤酵母中成功表达了重组抗菌肽,并进行体内外抗菌活性验证。(PMAP‑36)2表达产物能够抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长,并均无溶血活性,此方法为基因工程方法规模化生产抗菌肽奠定了理论与实践基础,对建立肽类基因工程菌和抗菌肽研究的共性技术具有重要意义。
本发明提供一种猪源衍生杂合抗菌肽MDP‑2及其制备方法和应用,其序列如序列表SEQ ID No.2所示。本发明根据抗菌肽PMAP‑23或PMAP‑36的氨基酸组成特点和分布,将天然抗菌肽进行截短和残基替换,得到猪源衍生肽;将衍生肽与髓样分化蛋白‑2的脂多糖绑定序列相互连接,以进一步增强衍生肽的细菌靶定能力
其序列如序列表SEQ ID No.2所示。制备方法:通过对猪源抗菌肽PMAP‑36中特征性片段的截取和改造,得到了以WXYX为骨架序列重复三次的衍生肽WK12。其治疗指数高达90.46,是PMAP‑36治疗指数的35.9倍。通过该方法制备的抗菌肽在保证衍生肽高抗菌活性的前提下,降低了抗菌肽的肽链长度,提高了抗菌肽的细胞选择指数,具有成为抗生素替代物的潜质。