本发明公开了一种ADP‑核糖基环化酶高效重组表达及其蛋白纯化的方法。所述重组表达的方法通过对海兔(Aplysia californica)的ADP‑核糖基环化酶基因进行密码子优化,获得改造的ADP‑核糖基环化酶基因序列如SEQ ID NO:2所示,优化后的基因在毕赤酵母中能够高表达,每升酵母菌液蛋白产量大于1.2克;此外,本发明提供的阳离子交换层析与疏水作用层析组合的蛋白纯化方法可实现对ADP‑核糖基环化酶的有效纯化,采用该纯化方法获得的每个洗脱收集液只有单一目标蛋白峰,去除了RNA酶污染,且各个洗脱收集液都可以进行高效的ADP‑核糖基环化酶催化反应。