本发明公开了一种以痘苗病毒天坛株为载体的新冠疫苗及其构建方法,属于生物工程领域。本发明用于新冠疫苗的重组病毒的构建方法包括如下步骤:(1)使用引物对P233、P234扩增RBD 5‘端片段,使用引物对p235、p236扩增RBD 3’片段,再通过重叠PCR扩增全长RBD片段,各引物序列分别如SEQ ID NO.1‑4所示;(2)以pCDNA3.1‑LARA为骨架载体,通过酶切、连接、转化将RBD片段连入骨架载体上,构建重组穿梭质粒pCDNA3.1‑LARA‑S2RBD;(3)通过脂质体介导法将重组穿梭质粒转化到痘苗病毒天坛株中进行同源重组,得到重组病毒,该重组病毒能诱导产生新冠病毒的中和抗体。