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[发明专利]一种小麦原生质体、细胞质和叶绿体的分离方法-CN202110453677.0有效
发明人：宫磊;王天雅;王晓飞;赵雪汝;李长平;徐娟娟;郎曼;丁宝旭;马欣彤;于亚男;曹青禾 -专利权人：东北师范大学
申请日： 2021-04-26 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种小麦原生质体、细胞质和叶绿体的分离方法。该方法首先对小麦叶片进行原生质体的提取，之后利用蔗糖密度梯度离心法对原生质体进一步纯化，得到近乎完整的原生质体；然后将原生质体破碎，叶绿体完整保留，通过离心进行分离获得完整的叶绿体和细胞质。本发明能有效的对叶绿体和细胞质进行分离，并且交叉污染较少，可进一步对细胞不同组分进行更深层的研究。本发明具有重要的应用价值。
一种小麦原生质体细胞质叶绿体分离方法

[发明专利]一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法-CN201811516610.1在审
发明人：胡爱生;胡心宇 -专利权人：怀化市共生农业系统工程研究所(普通合伙)
申请日： 2018-12-12 - 公布日： 2019-03-15 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明公开了一种原生质微创伤外部导入活细胞的方法，包括如下步骤：使用获得植物体作为目标材料，对目标材料造成创伤；获得外源原生质组织液，然后将目标材料浸泡到外源原生质组织液中；取浸泡后成活的目标材料种植，筛选出外源原生质与目标材料杂交成功的材料即为目标材料。本发明通过导入外源原生质可跨越巨大的亲缘关系距离，实现远缘无性杂交育种的目的。
目标材料外源活细胞微创伤组织液浸泡植物体无性杂交育种亲缘关系外部远缘成活创伤杂交筛选种植成功

[发明专利]缢江蓠原生质体的制备方法-CN201610161826.5有效
发明人：刘涛;张磊 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2016-03-22 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了缢江蓠原生质体制备的方法，研究了海洋动物提取酶对缢江蓠组织的解离效果，建立了缢江蓠原生质体制备方法，分离出缢江蓠体细胞原生质体。本发明的优点是成功获得了缢江蓠的原生质，可以应用于细胞壁和细胞质膜功能的研究、种间细胞杂交、遗传工程研究等领域。
江蓠原生质体制备方法

[发明专利]一种芋根江蓠原生质体的提取方法-CN201510383349.2有效
发明人：孙利军;辛修锋;孙立平;叶克苁 -专利权人：青岛利邦达海洋科技有限公司
申请日： 2015-07-03 - 公布日： 2018-10-16 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了芋根江蓠原生质体制备的方法，其主要是研究了不同工具酶分解海藻组织的效果，建立了芋根江蓠原生质体制备方法，游离出体细胞原生质体。本发明的优点是成功获得了芋根江蓠的原生质，可以应用于遗传转化、体细胞杂交、再生植株诱导、体细胞工程育苗等领域。
一种江蓠原生质体提取方法

[发明专利]甘蓝型油菜菘油细胞质雄性不育系的选育方法-CN201510639085.2在审
发明人：李再云;康雷;杜雪竹 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2015-09-29 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明属于油菜分子育种技术领域，具体涉及一种甘蓝型油菜菘油细胞质雄性不育系的选育方法。还涉及原生质体融合技术重组甘蓝型油菜-菘蓝的胞质和核基因组，创建重组胞质的细胞质雄性不育系。育种过程包括通过分离和提取甘蓝型油菜-菘蓝的叶肉原生质体，通过细胞融合方法获得甘蓝型油菜-菘蓝的原生质体融合的体细胞杂种；以所得的甘蓝型油菜-菘蓝的体细胞杂种菘蓝-甘蓝型油菜叶肉原生质体细胞杂种为母本，以甘蓝型油菜为父本进行多代回交，获得因雄蕊心皮化的细胞质雄性不育系；经过线粒体基因PCR扩增证实融合过程中线粒体基因组发生重组，导致核质不协调而表现出不育。
甘蓝油菜细胞质雄性不育选育方法

[发明专利]辣椒细胞质雄性不育系原生质体分离纯化及愈伤组织形成的方法-CN201110230979.8无效
发明人：王述彬;刁卫平;刘金兵;潘宝贵;戈伟 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2011-08-12 - 公布日： 2012-03-28 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：辣椒细胞质雄性不育系原生质体分离纯化及愈伤组织形成的方法，涉及原生质体来源、分离、纯化及原生质体培养和愈伤组织形成，属于生物技术科学领域。1）利用辣椒细胞质雄性不育系无菌苗真叶为材料分离原生质体；2）切取幼嫩叶片放入含有纤维素酶、果胶酶和离析酶的CPW9酶解溶液中，置于27℃摇床上黑暗处理；3）用300目尼龙筛过滤酶解液，经离心洗涤后收集原生质体；4）将获得的原生质体培养于含有不同浓度激素的液体培养基中，期间定期添加新鲜培养基，直至愈伤组织形成。该发明利用辣椒雄性不育材料进行原生质体分离和培养，对进一步研究原生质体融合以及利用融合技术实现新型辣椒雄性不育系材料的创制具有重要的意义。
辣椒细胞质雄性不育原生质体分离纯化组织形成方法

[发明专利]一种杜梨原生质体的制备方法-CN201710360788.0有效
发明人：唐君;常有宏;蔺经;李晓刚 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2017-05-19 - 公布日： 2017-07-21 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于细胞生物学及生物技术领域，公开了一种杜梨原生质体的制备方法。本发明通过杜梨材料的前处理和质壁分离处理，利用纤维素酶、离析酶和果胶酶组合酶解杜梨叶肉组织，有效实现了杜梨原生质体的制备，克服了杜梨原生质体难以分离的问题，有效建立了杜梨叶肉原生质体的制备方法。本发明为突破杜梨遗传转化瓶颈，建立杜梨细胞工程技术体系，为杜梨原生质体遗传转化、基因瞬时表达检测、原生质体融合等提供了技术依据。
一种杜梨原生质体制备方法

[发明专利]一种莴苣原生质体的提取方法-CN201110375704.3无效
发明人：王晓军;王卉;宁慧霞;刘敏;郝秀英;努尔波拉提;徐琴 -专利权人：中国科学院新疆理化技术研究所
申请日： 2011-11-23 - 公布日： 2012-05-02 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种莴苣原生质体的提取方法，该方法由莴苣无菌苗的培养、原生质体的质壁分离、原生质体的酶解以及原生质体的纯化四个步骤完成。该方法以提高莴苣原生质体的活力，简单易于操作，分离材料易于得到，酶解的方法简单，去除细胞壁条件温和，分离的原生质体得率高，活性强，易于莴苣原生质体的培养和植株再生，为原生质体融合奠定了基础。另外原生质体的超低温保存对于有优良性状的种质资源的保存也有极其重要的价值。
一种莴苣原生质体提取方法

[发明专利]一种拟南芥叶肉细胞原生质体及其制备方法和应用-CN201811394334.6有效
发明人：史勇;金维环;陈彦惠;任真真;刘姣姣;王林会 -专利权人：河南农业大学
申请日： 2018-11-21 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种拟南芥叶肉细胞原生质体的制备方法，具体步骤如下：剪取3‑5周的拟南芥叶片用无弹性的纸质胶带或布质胶带固定叶片的上表皮和下表皮；轻轻撕掉叶片下表皮的无弹性的纸质胶带或布质胶带，将剪好的叶片放入含有酶解液的培养皿中；将放有叶片的培养皿置于摇床中培养30‑90min或者直至绝大部分或全部原生质体从叶片上脱离下来为止；将含有原生质体的酶解液转移到圆底离心管中，离心收集原生质体；用预冷的W5溶液清洗原生质体，用W5溶液重悬原生质体并在冰上放置最少本发明将原生质体置于黑暗条件下培养，有效解决了光照培养引起的细胞死亡和凝聚现象，能极大的提高转化效率。
一种拟南芥叶肉细胞原生质体及其制备方法应用

[发明专利]生产水稻杂种植物的方法-CN89101628.7无效
发明人：赤木宏宋;坂本正弘;滕村逹人 -专利权人：三井化学株式会社
申请日： 1989-02-02 - 公布日： 1999-06-16 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产稻杂种的方法，该方法包括下列步骤对在细胞质中含有的第一有用基因的第一稻原生质体进行Ｘ射线照射，以选择性地只破坏其核质；用大约１０—３０ｍＭ的碘乙酰胺、大约为０．１～０．５ｍＭ若丹明６Ｇ或大约为１０～３０ｍＭiodoacetage处理核质中含第二有用基因的第二稻原生质体以选择性地钝化细胞质；融合经处理的第一和第二原生质体以形成只具有含第一有用基因的核质和只具有含第二有用基因的细胞质的杂种细胞
生产水稻杂种植物方法

[发明专利]利用野芥不育细胞质制备油菜及十字花科蔬菜杂种的方法-CN200710052080.5有效
发明人：胡琼;李云昌;梅德圣;李英德;徐育松 -专利权人：中国农业科学院油料作物研究所
申请日： 2007-04-30 - 公布日： 2007-10-03 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用野芥不育细胞质制备油菜及十字花科蔬菜杂种的方法，其主要步骤为：A.属间杂种的获得，首先是叶肉原生质体的分离；其次是原生质体的纯化；第三是原生质前处理及融合；第四是原生质体培养及杂种鉴定繁殖；B.野芥细胞质雄性不育恢复品系的选育；C.野芥细胞质雄性不育及恢复性状向十字花科蔬菜的转育；D.野芥细胞质雄性不育杂交生产，即以油菜或十字花科蔬菜的野芥细胞质雄性不育系为母本，以雄性可育的油菜或十字花科蔬菜品种为父本
利用不育细胞质制备油菜十字花科蔬菜杂种方法

[发明专利]一种玉米珠心原生质体的制备和转化方法-CN201410052434.6有效
发明人：黄玉碧;张军杰;陈江;刘汉梅;胡育峰;刘应;余国武;顾勇 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2014-02-17 - 公布日： 2014-05-14 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种玉米珠心原生质体的制备和转化方法，涉及细胞工程领域。本发明是取授粉后6天到8天的玉米珠心组织，高渗处理后酶解，然后再用含0.55M甘露醇的MMG溶液重悬，制得珠心原生质体；最后采用PEG诱导转化。本发明操作简单，制备珠心原生质数量大、活性高，原生质细胞转化效率高，为后续基因功能分析，特别是有关细胞程序化死亡机理解析提供有力的技术支持。
一种玉米原生质体制备转化方法

[发明专利]柠檬酸提取梨花粉原生质体的方法-CN200610037844.9无效
发明人：张绍铃;屈海泳;吴俊 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2006-01-17 - 公布日： 2006-07-12 - 主分类号： A23L1/076 文献下载
摘要：本发明梨花粉和花粉管原生质体的提取方法，涉及植物体细胞壁的破除和原生质体获取的方法，是属于生物化学及食品科学领域；本发明主要是依据植物花粉细胞壁的特性来获取完整的花粉或花粉管原生质体，而且保持原有的活力利用柠檬酸去除花粉壁的方法，该方法是将干燥的花粉放入2－3mol/L柠檬酸液中，经过约30分钟左右的培养，可看到花粉的原生质体逐渐从萌芽口处出来，通过离心能够获得脱壁的花粉原生质体，该方法获得了原生质，
柠檬酸提取梨花原生质体方法

[发明专利]一种高效的玉米根尖病原菌侵染及原生质体悬液制备的方法-CN202310636769.1在审
发明人：曹言勇;段灿星;韩胜博;李会勇 -专利权人：河南省农业科学院粮食作物研究所;中国农业科学院作物科学研究所
申请日： 2023-05-31 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效的玉米根尖病原菌侵染及原生质体悬液制备的方法，所述原生质体悬液的制备方法，包括如下步骤：1)将待制备原生质体的植物器官在预处理液中进行质壁分离预处理，得到预处理后的植物器官，所述预处理液为包含L‑半胱氨酸和山梨糖醇的水溶液；2)将步骤1)中预处理后的植物器官切片，在酶解液中酶解处理，得到含有原生质体的粗提液，所述酶解液为包含纤维素酶、果胶酶和离析酶的水溶液；3)将步骤2)中含有原生质体的粗提液进一步纯化，得到原生质体混合液。本发明的方法制备的原生质体悬浮液中的细胞碎片等杂质得到有效清除，且获得原生质体质量较高，达到单细胞测序的要求。
一种高效玉米根尖病原菌侵染原生质体制备方法

[发明专利]一种分离八仙花萼片着色细胞原生质体的方法-CN202010298365.2有效
发明人：袁素霞;刘春;张盖天;杨锁宁 -专利权人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所
申请日： 2020-04-16 - 公布日： 2021-12-28 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及原生质体分离技术领域，公开了一种分离八仙花萼片着色细胞原生质体的方法，包括处理八仙花萼片、酶解、纯化和储存。本发明专门针对八仙花萼片的组织质密紧实、酶液不易浸入的特点，利用温和的酶解反应，在不损害八仙花萼片的细胞活性的条件下有效的提取出了八仙花萼片着色细胞原生质体，并且能清晰准确的辨别解离出的细胞颜色，为有针对性的对八仙花萼片中的特定着色细胞原生质体的基因水平
一种分离八仙花萼片着色细胞原生质体方法

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