本发明公开一种重组拓扑异构酶及其在构建测序文库中的应用。本发明首先公开了氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的重组拓扑异构酶。本发明进一步公开了上述重组拓扑异构酶在测序文库的构建中的应用。本发明创造性地将拓扑异构酶应用到酶切法DNA建库体系中，使得对DNA样本的片段化、末端修复和3’加A尾处理效率更高，更容易达到平衡；另外，重组拓扑异构酶参与的DNA解链和切割作用解决了测序文库构建过程中的酶切反应中单链快速退火形成双链使末端修复不彻底
本发明涉及酶工程技术领域，尤其涉及耐高温的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其应用，该耐高温的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.7所示。本发明中的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶TsDAE2，其最适温度为85℃，在80℃条件下的半衰期大于11h，其热催化性能明显优于目前已报导的同类酶。该D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶TsDAE2的最适pH为5.5，在酸性条件下和嗜热葡萄糖异构酶偶联催化500g/L葡萄糖异构化制备D‑阿洛酮糖，反应达到平衡时，D‑阿洛酮糖的终浓度为115g/L，反应液色度为
