本发明首先获得针对myostatin第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示;接着构建myostatin第二外显子的sgRNA表达结构,并将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前,同时构建Cas9蛋白的体外转录载体,以T7启动子调控。利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9mRNA和sgRNA,可用于生产敲除myostatin基因的动物。
本发明首先获得针对FGF5第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示;接着构建FGF5第二外显子的sgRNA表达结构,并将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前,同时构建Cas9蛋白的体外转录载体,以T7启动子调控。利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA和sgRNA,可用于生产敲除FGF5基因的动物。
本发明属于生物技术领域,公开了一种广谱靶向多种亚型流感病毒的crRNA转录载体,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。该crRNA转录载体可经体外转录得到CRISPR‑Cas13d的crRNA,其和Cas13d mRNA配合,可达到广谱抗流感病毒的效果;具体来说,经设计的CRISPR‑Cas13d系统可以同时靶向流感病毒