本发明属于生物工程技术领域，涉及工业微生物的育种，特别涉及一种生产碱性蛋白酶的底盘菌株及其构建方法与用途。本发明提供了一种地衣芽孢杆菌基因工程菌株，该基因工程菌株不表达地衣芽孢杆菌基因组上的chiAB，PulA，AmyA，spo0A，sigF，eps，pgs，lchAC以及核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的SacB基因，同时过表达碱性蛋白酶基因aprE。本发明从实验和生产中的实际情况出发，通过对基因工程宿主的改造简化，最终获得了一种能够高产碱性蛋白酶的底盘菌株，并且为构建蛋白酶高产底盘菌株提供了新的思路。
本发明公开了一株新型重组BCG菌株及其构建方法和应用。本发明的新型重组BCG菌株是由野生型牛分枝杆菌ATCC1173P2经过基因改造获得，基因改造方法为：利用潮霉素基因hyg片段替代野生型牛分枝杆菌的esxH基因片段；其中，esxH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；潮霉素基因hyg的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明的新型重组BCG菌株与野生型牛分枝杆菌ATCC1173P2相比，新型重组BCG菌株的胞内铁载体的含量提高了12.5倍，并且纯化得到的铁载体纯度高。本发明的新型重组BCG菌株可以用于铁载体的高效生产。
本发明公开了一种焦磷酸酶基因的用途，焦磷酸酶基因folQ在提高植物乳杆菌叶酸合成中的应用，所述焦磷酸酶基因folQ的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；本发明将基因folQ与组成型载体pMG36e酶切连接后，获得重组表达载体，将其转入植物乳杆菌YM‑4‑3中，在YM‑4‑3菌株体内实现基因folQ的过表达，获得过表达菌株；采用LC‑MS法测定菌株产叶酸能力，发现与野生型菌株相比，BDQ菌株产叶酸单谷氨酸含量增加，folQ基因在叶酸合成中起关键作用，本发明在叶酸生物合成研究及应用领域具有巨大潜力。
