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[发明专利]一种重组泛素连接酶SH2-U-box融合基因及其表达载体和用途-CN201110387869.2无效
发明人：李霞;张璟;茹懿;李瑗春;王秦豪;钟代星;刘新平;药立波 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2011-11-29 - 公布日： 2012-06-27 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：所构建的SH2-U-box融合基因，能够被克隆到不同的表达载体，从而通过不同的途径进入到肿瘤细胞中发挥作用，所述的表达载体包括真核表达载体或腺病毒表达载体。该融合基因在转染肿瘤细胞之后，能够下调宿主肿瘤细胞的致癌相关蛋白BCR/Abl，肿瘤细胞的细胞增殖能力显著被降低，表现出对肿瘤细胞的增殖抑制和侵袭抑制，从而达到抗肿瘤的效果。
一种重组连接酶 sh2 box 融合基因及其表达载体用途

[发明专利]一种人重组白介素-3的表达纯化方法-CN201110009028.8有效
发明人：吴东海;李洪波;金守光;徐爱民;李侍武 -专利权人：中国科学院广州生物医药与健康研究院
申请日： 2011-01-17 - 公布日： 2011-08-10 - 主分类号： C12N15/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达人重组白介素-3(rhIL-3)的毕赤酵母转化子及其纯化方法，真核宿主为毕赤酵母X-33，主要包括以下步骤：克隆人IL-3基因；构建真核表达载体并转化其到真核酵母宿主中；通过筛选本发明改变了传统的用原核宿主表达rhIL-3，首次利用毕赤酵母表达系统大量表达rhIL-3的方法，通过His-tag标签蛋白得到快速纯化，纯化的rIL-3是经不同程度糖基化的分子量分别在19kDa和22kDa
一种重组白介素表达纯化方法

[发明专利]聚唾液酸、血型抗原以及糖蛋白表达-CN201110156018.7有效
发明人：朱迪思·H·梅利特;亚当·C·费舍尔;布莱恩·S·汉密尔顿;马修·P·德里萨 -专利权人：格里科比亚有限公司;朱迪思·H·梅利特;亚当·C·费舍尔;布莱恩·S·汉密尔顿;马修·P·德里萨
申请日： 2014-03-15 - 公布日： 2011-12-21 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：在此描述的本发明总体上涉及用于产生治疗用途的糖蛋白的糖工程宿主细胞。对宿主细胞进行修饰以表达生物合成糖基化途径。对新型原核生物宿主细胞进行工程化以产生N-连接糖蛋白，其中，该糖蛋白包含聚唾液酸或血型抗原。
唾液酸血型抗原以及糖蛋白表达

[发明专利]聚唾液酸、血型抗原以及糖蛋白表达-CN201480028496.1在审
发明人：朱迪思·H·梅利特;亚当·C·费舍尔;布莱恩·S·汉密尔顿;马修·P·德里萨 -专利权人：格里科比亚有限公司;朱迪思·H·梅利特;亚当·C·费舍尔;布莱恩·S·汉密尔顿;马修·P·德里萨
申请日： 2014-03-15 - 公布日： 2016-03-09 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：在此描述的本发明总体上涉及用于产生治疗用途的糖蛋白的糖工程宿主细胞。对宿主细胞进行修饰以表达生物合成糖基化途径。对新型原核生物宿主细胞进行工程化以产生N-连接糖蛋白，其中，该糖蛋白包含聚唾液酸或血型抗原。
唾液酸血型抗原以及糖蛋白表达

[发明专利]一种构建真核生物cDNA文库的方法及其专用引物-CN201010277702.6有效
发明人：宋雪梅;蒋永清;燕飞;陈剑平;姜俊芳 -专利权人：浙江省农业科学院
申请日： 2010-09-09 - 公布日： 2011-02-16 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种构建真核生物cDNA文库的方法及其专用引物，属于基因工程技术领域。专用引物共有两对，一对为序列表中的3RRT和5RRT；另一对为序列表中的3AP和5AP。为引物合成第一链cDNA；2)以序列表中的3AP和5AP合成双链cDNA；3)经琼脂糖凝胶电泳去除合成不完全的小片段产物后，将双链cDNA与pCR-XL-TOPO长片段PCR克隆载体重组连接，再将连接产物转化宿主大肠杆菌XL-Gold感受态细胞，即完成cDNA文库的构建。本发明可普遍用于mRNA具有polyA尾端的真核生物样品的cDNA文库构建。
一种构建生物 cdna 文库方法及其专用引物

[发明专利]在原核宿主细胞中制备重组蛋白-CN200910003574.3有效
发明人：罗尔夫-冈瑟·沃纳;克劳斯·伯格曼;弗里德里克·戈茨;安德烈亚斯·佩希尔 -专利权人：贝林格尔.英格海姆国际有限公司
申请日： 2001-07-21 - 公布日： 2009-09-09 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明涉及在原核宿主细胞中制备异源蛋白的便利方法，是通过改进所述宿主细胞中密码子的应用和/或编码罕有密码子的tRNA的表达进行的。
宿主细胞制备重组蛋白

[发明专利]在原核宿主细胞中制备重组蛋白-CN01813410.6无效
发明人：罗尔夫－冈瑟·沃纳;克劳斯·伯格曼;弗里德里克·戈茨;安德烈亚斯·佩希尔 -专利权人：贝林格尔·英格海姆国际有限公司
申请日： 2001-07-21 - 公布日： 2003-09-24 - 主分类号： C12N15/67 文献下载
摘要：本发明涉及在原核宿主细胞中制备异源蛋白的便利方法，是通过改进所述宿主细胞中密码子的应用和/或编码罕有密码子的tRNA的表达进行的。
宿主细胞制备重组蛋白

[发明专利]一种用于单细胞核测序的棉花根部单细胞核悬液制备的方法-CN202310352080.6在审
发明人：万素梅;李燕芳;李鹏涛;陈国栋;赵梓霖;谷昊南;刘乾坤;彭仁海;杨舒涵 -专利权人：塔里木大学;安阳工学院
申请日： 2023-04-04 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于单细胞核测序的棉花根部单细胞核悬液制备的方法，该方法包括将棉花种子置于蛭石沙土纸杯中萌发生长，生长至种子第一片真叶展开时，去除侧根，取下胚轴以下的主根部分获得根部组织；取根部组织置于冰上的培养皿中，加入一定量切割缓冲液，用刀片多次切割根部组织释放细胞核，获得粗细胞核悬液；收集培养皿中的粗细胞核悬液，通过尼龙膜过滤，加入荧光染料进行标记，分选后离心，丢弃上清，收集沉淀使用细胞核保存液进行重悬。通过本发明的方法能够获得高质量的棉花根部单细胞核悬液，完全满足单细胞核测序的上机要求，一定程度上解决了棉花真叶期根部细胞核释放的困难，对于棉花的遗传发育研究和育种进程的加快至关重要。
一种用于细胞核棉花根部制备方法

[发明专利]PCV2重组杆状病毒样颗粒亚单位疫苗及制备方法-CN201710956948.8在审
发明人：任红涛;刘健鹏;邹权 -专利权人：北京生科基因科技有限公司;榆林市动物疫病预防控制中心;垫江县动物卫生监督所
申请日： 2017-10-16 - 公布日： 2018-05-04 - 主分类号： A61K39/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种PCV2重组杆状病毒样颗粒亚单位疫苗及其制备方法，所述疫苗以昆虫作为宿主细胞，转染包含PCV2重组杆状病毒ORF2基因片段的真核表达载体，所述PCV2重组杆状病毒ORF2基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述真核表达载体为pAcGP67‑A‑PCV2。所述方法利用分子生物学手段构建含有高免疫原性PCV2ORF2核苷酸序列的重组杆状病毒，所述重组病毒能够在Sf9细胞系中高效表达PCV2衣壳蛋白，并在胞质内组装成具有PCV2表面抗原的PCV2病毒样颗粒。
pcv2 重组杆状病毒颗粒单位疫苗制备方法

[发明专利]一种可识别肿瘤表面的CEA蛋白与表达3C蛋白的短链噬菌粒及其构建与应用-CN202310735301.8在审
发明人：刘婷婷;蔡良良 -专利权人：扬州大学
申请日： 2023-06-20 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明拟将塞内卡谷病毒(SVV)非结构蛋白3C置于真核表达框，与M13噬菌体包装元件连接，同时将癌胚抗原的单链抗体序列导入M13噬菌体的pIII基因中，制备噬菌粒质粒。此噬菌粒质粒转化宿主后共感染辅助噬菌体M13KO7‑ACEA scFv，获得短链的高效靶向肿瘤细胞的噬菌粒，通过透射电镜和荧光观察等鉴定短链噬菌粒。本发明首次将噬菌体pⅢ展示系统和真核表达元件整合到一起，形成了具有靶向和在真核细胞表达基因的短链噬菌粒，从而丰富了噬菌体形态，并为其生物学和医学应用提供了新的工具和方法。
一种识别肿瘤表面 cea 蛋白表达短链噬菌粒及其构建应用

[发明专利]鸡白细胞介素－2(IL－2)基因与真核表达质粒及禽类疫苗的免疫增强剂-CN02103979.8无效
发明人：于涟;李建荣;黄耀伟;樊拥军 -专利权人：浙江大学
申请日： 2002-03-05 - 公布日： 2004-01-14 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明提供了一种鸡白细胞介素－2(IL－2)基因。本发明还提供一种含有IL－2基因的真核表达质粒，它以pC工作为真核表达载体，含有上述白IL－2基因的编码序列的重组载体。本发明还提供了一种禽类疫苗的免疫增强剂，它为上述真核表达质粒的水溶液，其浓度为1－20μg/μl；或为含有上述真核表达质粒在真核细胞或动物体内所表达的鸡白细胞介素－2蛋白，鸡白细胞介素－2蛋白所占重量比为该免疫增强剂可应用于多种禽类DNA疫苗，它具有生物学活性，价格低廉，它能增强疫苗诱导机体的细胞免疫应答和体液免疫应答，延长免疫力和持续时间，也可降低疫苗的使用剂量，从而可降低成本，它具有免疫增强及免疫治疗作用
白细胞 il 基因表达质粒禽类疫苗免疫增强

[发明专利]以肿瘤细胞miR-221/222为药靶的抗癌重组腺病毒和构建方法及用途-CN200910067879.0无效
发明人：康春生;张春智;浦佩玉;王广秀;贾志凡;张安玲;韩磊 -专利权人：天津医科大学总医院
申请日： 2009-02-18 - 公布日： 2009-08-12 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种应用遗传工程的方法在细胞内获得靶向敲低miRNA表达的构建方案，以及用该方案获取的重组腺病毒和真核表达质粒在肿瘤治疗药物制备中的用途。用定向克隆、同源重组、转染、腺病毒纯化等技术，获得重组腺病毒和真核表达质粒，即在多克隆位点下游分别插入针对人源性和小鼠源性U6启动子，在U6启动子下游连接反义的miR-221和miR-222成熟序列片断(序列表中的序列1至4)，所获得重组腺病毒和真核表达质粒能选在胶质瘤、胃癌、乳腺癌等肿瘤细胞内复制增殖；插入的反义miR-221/222cDNA片段在肿瘤细胞内高效表达，抑制肿瘤细胞miR-221/222的表达；对肿瘤细胞具有强效旁观者效应。该腺病毒和真核表达质粒在肿瘤治疗药物、放射治疗增敏的制备中具有独特的实用价值。
肿瘤细胞 mir 221 222 抗癌重组病毒构建方法用途

[发明专利]一种蛋白酶的抑制剂蛋白及其用途-CN200480015268.7有效
发明人： D·德佩尔特;S·克卢捷 -专利权人：洛桑大学
申请日： 2004-04-05 - 公布日： 2006-07-05 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明还提供了一种已分离纯化的DNA序列，该DNA序列编码所述蛋白酶的嵌合抑制剂蛋白；一种特征在于其中含有所述已分离纯化的DNA序列的表达载体；一种转化了所述表达载体的原核或真核宿主细胞；以及提供了一种制备嵌合抑制剂蛋白的方法
一种蛋白酶抑制剂蛋白及其用途

[发明专利]重组人VEGF与bFGF真核表达载体、融合蛋白及其用途-CN200510051165.2无效
发明人：王雅梅;祁雅慧;邴国英 -专利权人：首都医科大学
申请日： 2005-03-02 - 公布日： 2005-08-17 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及重组真核表达载体，其中在真核表达载体上插入了人血管内皮细胞生长因子(VEGF)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因。本发明还涉及融合蛋白，由人血管内皮生长因子基因与碱性成纤维细胞生长因子组成。所述重组载体和融合蛋白可以用来预防或者治疗缺血性疾病。
重组 vegf bfgf 表达载体融合蛋白及其用途

[发明专利]一种非洲猪瘟病毒p72蛋白稳定表达细胞系及其构建方法-CN202210699860.3在审
发明人：冯夏宁;李作生;陈瑞爱;刘郁夫;容芳;郝文茜;王圳 -专利权人：岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心
申请日： 2022-06-20 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种非洲猪瘟病毒p72蛋白稳定表达细胞系及其构建方法，在将p72蛋白完成序列改造得到重组蛋白后，分别将其克隆至原核表达载体、真核表达载体，分别进行原核表达、真核表达和；其中，在原核表达的过程中，能得到稳定表达p72重组蛋白的大肠杆菌以及能得到纯化后的p72重组蛋白；经过真核表达后，能得到稳定表达p72重组蛋白的CHO细胞株。利用本发明的构建方法能在2个月内筛选获得表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的CHO细胞株，并在没有嘌呤霉素筛选压力下，细胞系传至20代，仍可检测到外源重组蛋白，成功率为90％，具有试验周期短、成功率高和表达成本低的优点
一种非洲猪瘟病毒 p72 蛋白稳定表达细胞系及其构建方法