一种用于检测胆管癌的甲基化标志物、引物探针组合物和试剂盒及应用，涉及体外检测技术领域；甲基化标志物包括以下基因中任意两种以上的基因组合的甲基化：NGLY1、HOAG1和HOOK1基因；用于检测NGLY1基因甲基化的引物探针组合物的碱基序列如SEQ ID NO:1‑3所示，用于检测HOAG1基因甲基化的引物探针组合物的碱基序列如SEQ ID NO:4‑6所示；用于检测HOOK1基因甲基化的引物探针组合物的碱基序列如SEQ ID NO:7‑9所示；本发明通过多基因甲基化联合检测，将大幅提高对胆管癌筛查和诊断的敏感性和特异性。
本发明涉及一种基于微流控芯片式数字PCR的Septin9基因甲基化检测试剂盒。所述Septin9基因甲基化检测试剂盒包括针对Septin9基因V2转录本启动子区CpG岛甲基化的上下游引物和检测探针，所述上下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1~2所示，所述检测探针的核苷酸序列如所述Septin9基因甲基化检测试剂盒中还包括2×Probe Master Mix、ddH2O、核酸提取试剂、亚硫酸盐转化试剂、甲基化质粒标准品及非甲基化质粒标准品该Septin9基因甲基化检测试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好、线性范围广、混合样本检测能力强的优点。
本发明提供了用于检测肺结节良恶性的甲基化标志物及其应用。所述标志物包括序列为Seq ID No:1至Seq ID No:35所示序列或其完全互补序列中至少一个的片段、或所示序列及其上下游1kb序列在内的片段、所示序列的区域中的DNA甲基化位点、与所示序列具有至少90％以上序列同一性且与具有相同甲基化位点的变体或所示序列的区域中所覆盖的DNA甲基化单倍型及所述DNA甲基化单倍型的丰度。本发明基于肺结节良性和恶性样本的甲基化测序数据，筛选到甲基化水平在良性肺结节和恶性肺结节中存在明显差异的标志物,可以用于有效鉴别肺结节的良恶性，并且具有较高的灵敏度和特异性，适用于肺结节的早期鉴别与诊断
