本公开提供一种适于数字PCR定量检测肺癌相关基因甲基化的引物探针组合、试剂盒及检测方法,引物探针组合包括检测SHOX2、PTGER4以及RASSF1A基因甲基化的引物对和探针;检测SHOX2基因甲基化的引物对序列为SEQ ID NO.1‑2、SEQ ID NO.3‑4、SEQ ID NO.5‑6、SEQ ID NO.7‑8、SEQ IDNO.9‑10中的一对,探针序列为SEQ ID NO.11‑15中的一个;检测PTGER4基因甲基化的引物对序列为SEQ ID NO.16‑17、SEQ ID NO.18‑19、SEQ IDNO.20‑21、SEQ ID NO.22‑23、SEQ ID NO.24‑25、SEQ ID NO.26‑27中的一对,探针序列为SEQ ID NO.28‑33中的一个;检测RASSF1A基因甲基化的引物对序列为SEQ ID NO.34‑35、SEQ ID NO.36‑37、SEQ ID NO.38‑39、SEQ IDNO.40‑41、SEQ ID NO.42‑43、SEQ ID NO.44‑45、SEQ ID NO.46‑47、SEQ IDNO.48‑49中的一对,探针序列为SEQ ID NO.50‑57中的一个。引物探针组合的设计结合数字PCR检测系统,在早期肺癌中,即使靶标浓度极低,本方案也能表现出优异的灵敏度和精确度。