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- [发明专利]一种重组草鱼白介素-6活性蛋白的制备方法-CN202011072376.5在审
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汪新艳;曾婷婷;张娜;甘宁;张安英
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电子科技大学
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2020-10-09
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2021-01-01
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C07K14/54
- 本发明公开了一种重组草鱼白介素‑6活性蛋白的制备方法,包括以下步骤:S1.培养含表达质粒pET‑30/gcIL‑6的BL21(DE3)大肠杆菌,诱导蛋白表达15‑25h;S2.收集发酵液,离心,弃上清,重悬菌体,冻融10‑20h;S3.向菌液中加苯甲基磺酰氟溶液,超声处理,然后离心,收集沉淀即为包涵体;S4.用洗涤缓冲液对包涵体进行振荡洗涤,然后离心;S5.用1%Triton X‑114振荡洗涤包涵体,离心;S6.用3M尿素振荡洗涤包涵体,离心;S7.用含6M盐酸胍的结合缓冲液溶解包涵体,离心溶解5‑15min,留上清;S8.对蛋白进行纯化;S9.将纯化的蛋白滴加至折叠缓冲液中,然后搅拌10‑20h,再过滤,离心,得到蛋白溶液;S10.将蛋白溶液置于磷酸盐缓冲液中,离心,即得。
- 一种重组草鱼白介素活性蛋白制备方法
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