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[发明专利]环状RNA分子的扩增和测序方法-CN201610333965.1在审
发明人：吴伟彬;邱文英 -专利权人：上海德沛生物科技有限公司
申请日： 2016-05-18 - 公布日： 2017-11-28 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学领域，公开了一种环状RNA分子的扩增方法，步骤包括(1)取细胞总RNA与随机引物混合，升温后退火；(2)加入具有逆转录功能和滚环扩增功能的恒温扩增酶和dNTP进行逆转录和扩增。本方法不需要分离获得环状RNA，直接以总RNA为模板，同步进行逆转录和滚环扩增，简化操作流程，提高检测效率；灵敏度高，所需要的样品数量大大减少，准确率提高。
环状 rna 分子扩增方法

[发明专利]一种转录组测序-CN201711184564.5在审
发明人：于思创;王海云 -专利权人：南宁科城汇信息科技有限公司
申请日： 2017-11-23 - 公布日： 2018-02-23 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明公开了一种转录组测序，①总RNA→富集mRNA→RNA随机打断→用随机引物和逆转录酶从RNA片段合成cDNA片段→再cDNA片段末端修复，连接到测序接头→制备测序文库及测序；②总RNA→去除rRNA→富集mRNA→然后将RNA随机打断→用随机引物和逆转录酶从RNA片段合成cDNA片段→再cDNA片段末端修复→连接到测序接头→制备测序文库及测序③总RNA→然后Small RNA，再3’端，5’端接头连接→逆转录合成cDNA片段→制备测序文库及测序。
一种转录组测序

[发明专利]一种针对特定大小RNA片段的高通量测序文库构建方法-CN201510707080.9在审
发明人：郑洪坤;刘慧;郭强;方涛 -专利权人：北京百迈客生物科技有限公司
申请日： 2015-10-27 - 公布日： 2015-12-30 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明提供了一种针对特定大小RNA片段的高通量测序文库构建方法，包括以下步骤：去除总RNA中的DNA；去除总RNA中的rRNA；聚丙烯酰胺凝胶电泳切胶筛选目的大小的RNA；在RNA的3’端连接3’接头；以RNA为模板，加入与3’接头反向互补的逆转录引物进行退火，使3’接头与逆转录引物结合；在RNA的5’端连接5’接头；以RNA为模板，进行逆转录；使用逆转录引物与Index引物进行PCR反应，获得测序文库该方法可广泛用于包括原核小RNA在内的特定大小RNA片段的高通量测序。
一种针对特定大小 rna 片段通量序文构建方法

[发明专利]miR-15a作为主动脉夹层临床筛查分子标记物的应用及其试剂盒-CN201310322182.X有效
发明人：周建;景在平;陆清声;董健;赵志青;包俊敏;冯睿;冯翔;袁良喜 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学
申请日： 2013-07-29 - 公布日： 2013-10-23 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：一种主动脉夹层临床筛查试剂盒，其特征在于，具有：血浆总RNA提取试剂组、外源参照物、RNA逆转录试剂组、RNA逆转录引物组、实时定量PCR试剂组、实时定量PCR引物组和实时定量PCR探针组，其中，RNA逆转录引物组包括miR-15a逆转录引物和外源参照物逆转录引物，实时定量PCR引物组包括miR-15a实时定量PCR引物和外源参实时定量PCR引物，实时定量PCR探针组包括miR-15a实时定量PCR探针和外源参实时定量
mir 15 作为主动脉夹层临床分子标记应用及其试剂盒

[发明专利]miR-23a作为急性主动脉夹层鉴别诊断标记物的应用及其试剂盒-CN201310322822.7有效
发明人：景在平;周建;董健;陆清声;赵志青;包俊敏;冯睿;冯翔;袁良喜 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学
申请日： 2013-07-29 - 公布日： 2013-11-20 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：一种急性主动脉夹层鉴别试剂盒，其特征在于，具有：血浆总RNA提取试剂组、外源参照物、RNA逆转录试剂组、RNA逆转录引物组、实时定量PCR试剂组、实时定量PCR引物组和实时定量PCR探针组，其中，RNA逆转录引物组包括miR-23a逆转录引物和外源参照物逆转录引物，实时定量PCR引物组包括miR-23a实时定量PCR引物和外源参实时定量PCR引物，实时定量PCR探针组包括miR-23a实时定量PCR探针和外源参实时定量
mir 23 作为急性主动脉夹层鉴别诊断标记应用及其试剂盒

[发明专利]一种用于评估逆转录效率的方法及其应用-CN202210372220.1有效
发明人：牛春艳;戴新华;董莲华;王霞;高运华 -专利权人：中国计量科学研究院
申请日： 2022-04-11 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于评估逆转录效率的方法。对所建立的或所使用的逆转录‑PCR定量方法的逆转录效率，提出一套基于同位素稀释质谱法的高准确度逆转录效率评估方案。首先通过逆转录数字PCR对目的基因的RNA进行拷贝数浓度的测定，再进一步通过同位素稀释质谱法来测定该目的基因的RNA拷贝数浓度，计算获得的两种RNA拷贝数浓度的比值，从而获得相应的逆转录体系的逆转录效率通过对逆转录效率准确评估，修正逆转录PCR结果，从而获得目标RNA分子的准确含量，满足不同领域对RNA分子准确定值的需求。
一种用于评估逆转录效率方法及其应用

[发明专利]从临床标本中检测结核菌感染的逆转录PCR方法-CN201310068037.3有效
发明人：张凤民;付英梅;宋武琦;钱均;李玉军;李文静 -专利权人：哈尔滨医科大学
申请日： 2013-02-25 - 公布日： 2014-02-12 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种从临床标本中检测结核菌感染的逆转录PCR方法，用PCR检测方法对临床标本中结核菌的小RNA进行检测；步骤一：提取临床标本中的总RNA；步骤二：以步骤一中提取的总RNA为模板逆转录合成cDNA；步骤三：针对结核菌小RNA检测引物和步骤二中合成的cDNA进行PCR检测。
临床标本检测结核菌感染逆转录 pcr 方法

[发明专利]一种RNA文库的构建方法及试剂盒-CN202110493902.3有效
发明人：方圆;蔡青青;宋泽世 -专利权人：探因医学科技（浙江）有限公司
申请日： 2021-05-07 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本申请属于基因检测技术领域，具体公开一种RNA文库的构建方法，包括如下步骤：向片段化的总RNA中加入能够与rRNA特异性结合的探针，孵育，所述探针不带接头序列；加入逆转录体系进行第一次逆转录；加入带有接头序列的随机引物进行第二次逆转录，得到逆转录产物；加入连接引物和连接酶将所述逆转录产物进行连接，得到连接产物；加入扩增引物，对所述连接产物进行PCR扩增，得到所述RNA文库。本申请至少具有以下有益效果之一：本申请提供的构建方法通过先加入能够与rRNA特异性结合的探针，使探针与rRNA特异性地结合以封闭rRNA，使核糖体RNA无法进行扩增，从而达到了去除的目的。
一种 rna 文库构建方法试剂盒

[发明专利]一种未知融合基因的检测方法-CN202110263664.7在审
发明人：王沛;陈敏;郑乔松;张幸幸;师晓;王京京 -专利权人：北京泛生子基因科技有限公司
申请日： 2021-03-11 - 公布日： 2022-09-20 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明所要保护的构建未知融合基因检测文库的方法，包括将样本的总RNA在逆转录体系中进行逆转录或将所述总RNA片段化后在逆转录体系中进行逆转录获得逆转录产物；将所得逆转录产物在第一轮扩增体系中进行PCR扩增
一种未知融合基因检测方法

[发明专利]一种长链非编码RNAlnc‑HR1用途及克隆方法-CN201610823396.9有效
发明人：郭利伟;李端;杨婷婷;邓保国;刘瑞 -专利权人：新乡医学院
申请日： 2016-09-14 - 公布日： 2018-01-19 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明提供一种长链非编码RNA lnc‑HR1的克隆方法，包括提取细胞的总RNA，在所述总RAN中加入逆转录酶，所述总RAN逆转录成cDNA，以所述cDNA为PCR反应模板克隆得到所述lnc‑HR1。
一种长链非编码 rnalnc hr1 用途克隆方法

[发明专利]基于纳米孔测序同时获取病毒整合转录本和RNA修饰的检测方法和应用-CN202210932147.9在审
发明人：倪守峰;王伟伟;刘星宇;张利利;田埂 -专利权人：北京元码医学检验实验室有限公司
申请日： 2022-08-04 - 公布日： 2022-10-18 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开一种基于纳米孔测序同时获取病毒整合转录本和RNA修饰的检测方法及应用。包括：获得生物样品的总RNA；使总RNA经过分离纯化得到mRNA；将mRNA与逆转录接头连接；使逆转录接头与纳米孔测序接头连接；通过链特异性测序，使带有病毒整合的mRNA的文库单链通过位于芯片的纳米孔，而不测序互补cDNA链，同时检测出病毒整合转录本和RNA上的修饰信息。此外，本发明的方法能够避免反转录和PCR中的偏好性，以及逆转录和扩增过程中对RNA修饰信息的丢失，保留RNA天然属性，获得多种碱基变异，结构变异与修饰信息，从而能够区分高度相似的异构体、识别新转录本。
基于纳米孔测序同时获取病毒整合转录 rna 修饰检测方法应用

[发明专利]一种高效去除逆转录体系中残留引物的方法及应用-CN202211648359.0在审
发明人：苟德明;王俊 -专利权人：深圳大学
申请日： 2022-12-21 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提供了一种高效去除逆转录体系中残留引物的方法及应用。所述方法采用两步法进行逆转录并同时去除逆转录反应体系中残留逆转录引物。本发明在RNA逆转录反应发生后使用核酸外切酶消化逆转录体系中残留的逆转录引物，能够实现微量小RNA逆转录后不受残留逆转录引物对下游实验的影响。同时，本发明优化了兼容核酸外切酶的逆转录反应体系，可以实现在不影响逆转录效率的情况下，无需对逆转录产生的一链cDNA进行纯化，而直接加入核酸外切酶进行残留逆转录引物的消化。与传统方法比较，本发明实现了更早期的对残留逆转录引物的高效去除，使其在PCR过程中不再产生干扰效应，无需进行核酸电泳纯化目的条带，简化了实验方案。
一种高效去除逆转录体系残留引物方法应用

[发明专利]RNA检测试剂盒和方法-CN201780045231.6在审
发明人：李哉勋 -专利权人：海姆生物技术有限公司
申请日： 2017-07-20 - 公布日： 2019-04-26 - 主分类号： C12Q1/6827 文献下载
摘要：本发明涉及用于检测RNA分子，特别是小尺寸RNA分子如miRNA的试剂盒和方法。本发明提供了RNA检测试剂盒和方法，其中将用于逆转录的短引物用于逆转录过程，目的是使引物在逆转录反应溶液中迅速扩散并因此减少逆转录反应时间，使得能够提高整体PCR反应速率并且稳定和迅速地检测RNA。此外，本发明提供了RNA检测试剂盒和方法，其中在逆转录过程之后，通过使用远长于用于逆转录的引物之用于延伸的引物对单链cDNA进行延伸，因此可以获得足够长的模板以进行PCR扩增。
逆转录试剂盒引物检测RNA 逆转录反应溶液逆转录反应单链cDNA 短引物延伸扩散

[发明专利]新型微核糖核酸定量PCR（聚合酶链式反应）检测方法-CN200610027217.7有效
发明人：谭玉龙;张中华;段春晓;张佩琢 -专利权人：上海吉玛制药技术有限公司
申请日： 2006-06-01 - 公布日： 2007-12-05 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：一种新的微小RNA(microRNAs)和小干扰RNA(siRNAs)定量PCR检测方法。它应用逆转录引物的5′端和3′端临近碱基互补形成茎环状结构，利用逆转录引物3′端与靶核酸互补结合，应用逆转录酶进行逆转录反应；以逆转录引物中的部分序列作为PCR引物之一，对逆转录反应得到的cDNA进行扩增
新型核糖核酸定量 pcr 聚合链式反应检测方法

[发明专利]外泌体中核酸分子的检测方法-CN202110496477.3在审
发明人：徐学明;冯韵;田金金;冯菲菲 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2021-05-07 - 公布日： 2021-07-23 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明涉及一种简便快速检测外泌体中核酸分子的方法，其包括裂解样品中的外泌体，用于释放外泌体核酸分子；逆转录反应，其中所述外泌体裂解后不经过提取核酸分子或经过提取核酸分子后进行所有RNA的逆转录反应，即RT‑For‑All，使外泌体中所有RNA在同一反应中同时进行逆转录；其中在所述逆转录反应中使用包含通用接头(例如，miRNA Adapter)和随机引物的逆转录缓冲液。本方法通过直接溶解外泌体释放内含成分，无需提取RNA和DNA，直接在同一个逆转录反应中进行所有RNA的逆转录。可从微量外泌体中检测出各种RNA和DNA。
外泌体中核酸分子检测方法

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