本发明公开了一种通过功能结构域嫁接提高聚合酶大片段活性的方法:将Sso7d DNA结合蛋白的基因(如SEQ ID NO.1所示)与野生型Bst DNA聚合酶大片段的基因连接(如SEQ ID NO.2所示),得到的基因序列如SEQ ID NO.5所示,并转入原核表达载体进行表达、纯化,得到了重组的Bst DNA聚合酶大片段:Sso7d‑Bst DNA聚合酶,氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。通过反应速率检测结果显示:Sso7d‑Bst DNA聚合酶大片段较野生型的Bst DNA聚合酶大片段反应速率提高。
本发明属于生物工程领域,具体涉及具有DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用。本发明的DNA聚合酶的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:2所示和SEQ ID NO:3所示;编码所述DNA聚合酶的核苷酸序列包括如SEQ ID NO:1所示。同时,本发明提供一种包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的重组载体及其编码的DNA聚合酶、重组载体的制备方法和应用方法。本发明提供的DNA聚合酶活性的多肽、重组载体及其制备方法与应用,可在血清或土壤等样本中进行直接的聚合酶链式反应时,对样本溶液中抑制物的耐受性大幅度提高,可在样本溶液中直接有效地完成聚合酶链式反应,检测目标基因序列