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[发明专利]一种检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬效果的方法-CN201910885918.1有效
发明人：赖灯妮;邓放明 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2019-09-19 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明属于运用细胞生物学检测技术领域，公开了一种检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬效果的方法，包括花青素溶液制备、大鼠胰岛β细胞的培养、花青素对大鼠胰岛β细胞毒性浓度范围筛查、流式细胞技术构建高糖大鼠胰岛β细胞凋亡模型、活性氧自由基水平实验和蛋白印迹方法验证高糖大鼠胰岛β细胞凋亡模型、细胞免疫荧光法检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生自噬体效果、建立RFP‑GFP‑RIN稳定细胞株检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生自噬流效果、结合花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生自噬体和自噬流效果判断。本发明为花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬效果建立高通量筛选方法，并为花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬作用预防糖尿病提供理论依据。
一种检测花青素诱导大鼠胰岛细胞效果方法

[发明专利]一种大鼠可诱导多能干细胞及其制备方法-CN200810201352.8无效
发明人：肖磊;廖婧;陈思晔;崔春;陈霁君;任江涛 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2008-10-17 - 公布日： 2010-06-23 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种大鼠可诱导多能干细胞及其制备方法，本发明的大鼠可诱导多能干细胞的制备方法包括步骤：A)构建携带转录因子的慢病毒载体，所述转录因子选自：Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4，Lin28、Nanog；B)将步骤A)所得慢病毒载体以组合形式感染大鼠成体细胞，挑选形态类似胚胎干细胞的克隆传代培养，通过筛选符合胚胎干细胞特性的细胞克隆，得到大鼠iPS细胞。本发明有助于确立大鼠ES细胞建系的最适培养条件和方法；大鼠iPS细胞是大鼠基因打靶的良好载体，大鼠iPS细胞将利于揭示大鼠各基因功能和复杂的发育事件。
一种大鼠诱导多能干细胞及其制备方法

[发明专利]大鼠的遗传修饰-CN201910220141.7有效
发明人： J·D·李;W·奥尔巴克;D·赫斯林;D·弗伦德维;K·V·莱;D·M·瓦伦泽拉 -专利权人：瑞泽恩制药公司
申请日： 2014-02-20 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：提供了用于制备包括大鼠胚胎干(ES)细胞的大鼠多能细胞和全能细胞的组合物和方法。提供了用于改善大鼠中遗传修饰的生殖系传递效率或频率的组合物和方法。此类方法和组合物包括了含饲养细胞层以及大鼠ES细胞群或大鼠ES细胞系的体外培养物，其中所述体外培养条件维持所述ES细胞的多能性并且包含了具有小鼠白血病抑制因子(LIF)或者其活性变体或片段的培养基。还提供了建立此类大鼠ES细胞系的各种方法。还提供了选择遗传修饰的大鼠ES细胞的方法，以及由本文所提供的遗传修饰的大鼠ES细胞产生转基因大鼠的各种方法。另外提供了各种试剂盒和制品。
大鼠遗传修饰

[发明专利]大鼠的遗传修饰-CN201480021152.8有效
发明人： J·D·李;W·奥尔巴克;D·赫斯林;D·弗伦德维;K·V·莱;D·M·瓦伦泽拉 -专利权人：瑞泽恩制药公司
申请日： 2014-02-20 - 公布日： 2019-04-19 - 主分类号： C12N5/07 文献下载
摘要：提供了用于制备包括大鼠胚胎干(ES)细胞的大鼠多能细胞和全能细胞的组合物和方法。提供了用于改善大鼠中遗传修饰的生殖系传递效率或频率的组合物和方法。此类方法和组合物包括了含饲养细胞层以及大鼠ES细胞群或大鼠ES细胞系的体外培养物，其中所述体外培养条件维持所述ES细胞的多能性并且包含了具有小鼠白血病抑制因子(LIF)或者其活性变体或片段的培养基。还提供了建立此类大鼠ES细胞系的各种方法。还提供了选择遗传修饰的大鼠ES细胞的方法，以及由本文所提供的遗传修饰的大鼠ES细胞产生转基因大鼠的各种方法。另外提供了各种试剂盒和制品。
大鼠遗传修饰

[发明专利]一种大鼠原代气道上皮细胞的培养方法-CN201210233242.6无效
发明人：卢文菊;徐小明;王健;张雅洁;张晨婷 -专利权人：广州医学院第一附属医院;呼吸疾病国家重点实验室
申请日： 2012-07-06 - 公布日： 2012-11-21 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种大鼠原代气道上皮细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)大鼠气道组织细胞消化；(2)收集大鼠气道上皮细胞：收集步骤(1)消化处理后的消化液以及清洗的大鼠气道内壁的基础培养基，经离心获得大鼠气道上皮细胞；(3)将步骤(2)中收集所得的大鼠气道组织细胞置于铺有胶原蛋白的培养皿中，在37℃、5％CO2常氧环境下静置培养至获得具有纤毛、功能更接近体内细胞生活状态的大鼠原代气道上皮细胞。本发明可以提高上皮细胞的纯度，细胞具有状态良好，活性强。
一种大鼠原代气道上皮细胞培养方法

[发明专利]一种富集大鼠浆细胞及建立浆细胞杂交瘤的方法-CN202210003945.3在审
发明人：罗芳芳;陆青玲;王德宁;姬山泉;焦洪亮;梅芹;顾继杰 -专利权人：上海药明生物医药有限公司;上海药明生物技术有限公司
申请日： 2022-01-05 - 公布日： 2022-04-15 - 主分类号： C12N5/0781 文献下载
摘要：本发明公开了一种富集大鼠浆细胞及建立浆细胞杂交瘤的方法，包括以下步骤：S1、以大鼠CD138为靶点，利用杂交瘤技术开发特异性抗大鼠CD138单克隆抗体；S2、使用抗大鼠CD138抗体对大鼠浆细胞进行富集，抗大鼠CD138抗体中包含EZ‑Link NHS‑PEG4‑生物素；S3、对小鼠骨髓瘤细胞和大鼠浆细胞进行处理，将处理后的小鼠骨髓瘤细胞和大鼠浆细胞进行细胞电融合；S4、将融合细胞转移至HAT筛选培养基中，在CO2培养箱中培养1～2小时，再铺于96孔细胞培养板中培养，7～14天后进行杂交瘤抗体筛选。本发明提供的方法富集度高，且改良了大鼠浆细胞杂交瘤融合技术，使杂交瘤抗体阳性率提高了10‑20倍，极大地提高融合效率和大鼠浆细胞的生物利用度，且本方法铺板数量低，节约了人力和物力成本。
一种富集大鼠浆细胞建立杂交瘤方法

[发明专利]一种改良大鼠杂交瘤细胞制备的方法-CN201910309921.9在审
发明人：雍金贵;张伦;李森 -专利权人：安徽环球基因科技有限公司
申请日： 2019-04-17 - 公布日： 2019-08-06 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种改良大鼠杂交瘤细胞制备的方法，将细胞因子IL6稳定整合到大鼠骨髓瘤细胞IR983F中，制备出IR983F‑IL6细胞，IR983F‑IL6细胞自身可稳定分泌IL6，细胞活力及单个细胞生存能力远高于IR983F，当制备大鼠杂交瘤细胞后，杂交瘤细胞同样拥有IR983F‑IL6的特性，使得在没有饲养细胞的时候，可以轻松获得大鼠杂交瘤细胞；采用重组表达载体免疫动物大鼠；将大鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合；筛选获得产生目的蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；该方法可提高杂交瘤细胞活力及存活率，易于大鼠杂交瘤大规模培养制备，在单克隆抗体等蛋白质类生物材料的应用方面，可降低成本和实现规模化生产。
杂交瘤细胞大鼠制备单克隆抗体大鼠骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合改良杂交瘤细胞株重组表达载体大规模培养规模化生产细胞单个细胞蛋白质类免疫动物目的蛋白生存能力生物材料饲养细胞细胞活力细胞因子存活率脾细胞杂交瘤整合分泌筛选应用

[发明专利]使用大鼠胚胎干细胞构建嵌合大鼠的方法-CN201080054625.6在审
发明人：落谷孝广;川又理树 -专利权人：日本国立癌症研究中心;DS制药生物医学株式会社
申请日： 2010-11-30 - 公布日： 2012-10-31 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明提供了嵌合胚胎和嵌合大鼠的制备方法，其特征在于，在ES细胞分化抑制剂的存在下，使大鼠多能干细胞和宿主胚胎接触。所述方法包括：（a）在ES细胞分化抑制剂的存在下使从雌性大鼠采集的受精宿主胚胎与大鼠多能干细胞接触的步骤，和（b）培养与大鼠多能干细胞接触的宿主胚胎以形成嵌合胚胎的步骤。
使用大鼠胚胎干细胞构建嵌合方法

[发明专利]大鼠睾丸间质Leydig细胞的分离方法-CN202111218183.0在审
发明人：陈浩林;赵星仪;季敏鹏;温馨;陈丹 -专利权人：温州医科大学附属第二医院(温州医科大学附属育英儿童医院)
申请日： 2021-10-18 - 公布日： 2022-01-25 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种大鼠睾丸间质Leydig细胞分离的方法，包括如下步骤：获取大鼠睾丸并制备大鼠睾丸细胞悬浊液；标记大鼠睾丸细胞；磁珠分选(MACS)方法筛选其中的阳性细胞；通过磁珠分选方法重复提纯阳性细胞本发明的分离方法操作简单简单、细胞产量高、纯度高、活性高，并且不需要昂贵的设备。
大鼠睾丸间质 leydig 细胞分离方法

[发明专利]一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法-CN202211554420.5在审
发明人：董旭东;万慧敏;席佳玮;胡梅;腾玥;林江维;徐建林 -专利权人：云南省第一人民医院
申请日： 2022-12-06 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明公开一种大鼠原始内胚层干细胞分离建系的方法，包括大鼠着床胚胎的分离、培养体系及细胞系的鉴定。以SD大鼠着床后8.5天的胚胎为研究对象，分离大鼠受精后8.5天的胚胎进行着床后原始内胚层干细胞的分离，可用于早期胚胎发育体外研究的模型和再生医学(干细胞治疗)的探索，弥补了现有大鼠原始内胚层干细胞分离来源的不足
一种大鼠原始胚层干细胞分离方法

[发明专利]一种大鼠角膜内皮细胞的分离、纯化及培养方法-CN201510560497.7有效
发明人：田瑞;齐来俊;蒋敏;张亚洲 -专利权人：江苏齐氏生物科技有限公司
申请日： 2015-09-07 - 公布日： 2019-10-11 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种大鼠角膜内皮细胞的分离、纯化及培养的方法，属于细胞生物学领域；其包括以下步骤：(a)角膜组织样本分离，获得单个细胞；(b)制备特异性吸附角膜内皮细胞的免疫磁珠，从分离的单个细胞中纯化角膜内皮细胞；(c)优化的细胞培养液，培养大鼠角膜内皮细胞。本发明提供的大鼠角膜内皮细胞的分离方法，操作简单、细胞产量及成活率高；本发明提供的大鼠角膜内皮细胞纯化方法，操作简单、得率以及纯化率非常高；本发明提供的大鼠角膜内皮细胞培养方法，细胞增殖块、周期短以及经济效益高
一种大鼠角膜内皮细胞分离纯化培养方法

[发明专利]永生化大鼠骨髓基质细胞系及其制备方法-CN200810057663.1无效
发明人：段春礼;杨慧;赵春礼;孙晓红;鲁玲玲 -专利权人：首都医科大学
申请日： 2008-02-04 - 公布日： 2008-09-03 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种永生化大鼠骨髓基质细胞系及其制备方法。用本发明方法能在短时间内获得永生化大鼠骨髓基质细胞。本发明的hTERT永生化大鼠骨髓基质细胞系稳定，可以连续传代并保持二倍体核型和正常大鼠骨髓基质细胞特性，具备极强的增殖能力，真正实现了永生化。应用本发明方法所建立的永生化大鼠骨髓基质细胞系可以方便、快速地获得大量的具有二倍体核型的大鼠骨髓基质细胞。这对于研究骨髓基质细胞的体内外诱导和分化等无疑将具有巨大的促进作用。
永生大鼠骨髓基质细胞系及其制备方法

[发明专利]重组细胞球蛋白在延缓皮肤衰老中的应用-CN201010189909.8无效
发明人：许瑞安;张亭亭;李招发;刁勇 -专利权人：许瑞安
申请日： 2010-06-02 - 公布日： 2011-12-07 - 主分类号： C07K14/795 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组大鼠细胞球蛋白在延缓皮肤衰老中的应用，所述重组大鼠细胞球蛋白，通过构建基因工程菌pET22b-Cygb/E.coli.BL21(DE3)筛选高表达重组大鼠细胞球蛋白菌株，分离纯化鉴定得到高纯度重组大鼠细胞球蛋白
重组细胞球蛋白延缓皮肤衰老中的应用

[发明专利]一种毛囊干细胞诱导分化为血管内皮细胞的抑制方法-CN201610159935.3有效
发明人：全仁夫;杜伟斌;郑宣;李强;曹国平 -专利权人：杭州市萧山区中医院
申请日： 2016-03-21 - 公布日： 2019-04-02 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种毛囊干细胞诱导分化为血管内皮细胞的抑制方法，所述抑制方法包括：(1)大鼠毛囊干细胞的分离；(2)大鼠毛囊干细胞的培养；(3)大鼠毛囊干细胞的纯化；(4)大鼠毛囊干细胞诱导分化为血管内皮细胞的抑制本发明所提供的抑制方法首次采用血管内皮细胞生长因子165为诱导因子使大鼠毛囊干细胞向血管内皮细胞高效定向分化；能够调节毛囊干细胞诱导分化为血管内皮细胞的形成与生长，促进伤口的有效愈合；也可为组织工程化皮肤的血管化、细胞移植治疗缺血性疾病等难题提供种子细胞来源。
一种毛囊干细胞诱导化为血管内皮细胞抑制方法

[发明专利]一种大鼠肝星状细胞分离方法-CN201610298584.4在审
发明人：张清;张亚洲;蒋敏;齐来俊 -专利权人：江苏齐氏生物科技有限公司
申请日： 2016-05-03 - 公布日： 2017-11-10 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种大鼠肝星状细胞分离方法，包括步骤(a)腹腔注射10％水合氯醛麻醉大鼠，U型剖开大鼠腹腔以暴露肝脏及门静脉；(b)静脉注射肝素，预热灌流液灌注肝脏；(d)取充分灌注后的肝脏，剪碎后于预热消化液中震荡消化；(e)消化后的肝组织经多层筛网过滤，低速离心吸取上清，再次离心获得细胞沉淀，清洗液清洗一次；(f)将获得的细胞沉淀重悬，经Nycoden梯度离心分离；(g)细胞清洗数次，完全培养基重悬细胞沉淀，接种培养；(h)细胞免疫荧光鉴定大鼠肝星状细胞。本发明提供的大鼠肝星状细胞分离方法可获得产量高、纯度高、活性高且能被激活的大鼠肝星状细胞。
一种大鼠星状细胞分离方法

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