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[发明专利]一种从精液中分离提纯外泌体的方法-CN201810154782.2在审
发明人：邓春华;刘贵华;谢云;张弛;吕林艳;邓存灿 -专利权人：中山大学附属第一医院;中山大学附属第六医院
申请日： 2018-02-23 - 公布日： 2018-08-17 - 主分类号： G01N1/34 文献下载
摘要：本发明提供了一种从精液中分离提纯外泌体的方法，本发明与常规的外泌体分离提取方法相比，删减300g、2000g的低转速离心步骤，尽量避免外泌体被粘性物质带入下一步离心的细胞沉淀中，减少外泌体的损失。采用两步稀释法，减少了外泌体的损耗，提高了其纯度。采用8％PEG6000过夜处理，使外泌体纯度得到进一步提升。所使用PBS均采用0.1μm滤器过滤处理，减少了外来杂质的带入。通过该方法可以获得质量较高且纯度更加符合实验要求的精液来源外泌体。在对精液来源外泌体保质保量的前提下，最大限度的提高了其纯度。
精液分离提纯过滤处理大粒径颗粒分离提取离心步骤两步稀释实验要求外来杂质细胞沉淀粘性物质常规的低转速过滤法保质混入体被

[发明专利]脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液及贴敷的制备方法-CN201911382525.5在审
发明人：张伟;胡大海;李超 -专利权人：张伟
申请日： 2019-12-27 - 公布日： 2020-02-21 - 主分类号： A61L15/32 文献下载
摘要：本发明公开了一种脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液，由脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液组成，每毫升无菌胶原液中含有0.5‑0.8mg外泌体。其制备方法为：在无菌环境下，将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液混合并搅拌均匀，低温保存即可。本发明还公开了脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法，无菌条件下将脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液压合在两块无纺布中间，再装入铝箔袋中封口低温保存即可。本发明通过将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液相结合制得脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液，能够充分发挥两者的作用，对皮肤损伤修复以及创面修复有更好的治疗效果，且能够缩短创面愈合时间。
脂肪干细胞外泌体无菌胶原制备方法

[发明专利]无荧光染料标记外泌体及其制备方法-CN201910665088.1在审
发明人：梁高峰;景爱华;冯书营;安君岭;冯文坡;郝雪琴;杜景霞;李艳;高社干 -专利权人：河南科技大学
申请日： 2019-07-23 - 公布日： 2019-11-08 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种无荧光染料标记外泌体的制备方法，包括，步骤1：构建融合表达绿色荧光蛋白EGFP和外泌体标记蛋白LAMP的重组质粒；步骤2：将重组质粒和转染试剂按比例混合后，转染HEK293细胞，筛选获得稳定表达EGFP标记外泌体的HEK293细胞株；步骤3：从成功标记转染的HEK293细胞株中分离提取含有EGFP标记的外泌体。本发明利用基因工程化的HEK293细胞株，从其培养的上清液中提取含EGFP标记的外泌体，方法简便且外泌体不含荧光染料，利用外泌体的独特功能和EGFP在体内体外示踪的优越性，可避免常规荧光染料标记外泌体因染料扩散干扰荧光观察的弊端
荧光染料标记重组质粒转染制备绿色荧光蛋白EGFP 按比例混合细胞间物质常规荧光成功标记独特功能分离提取利用基因染料标记染料扩散融合表达稳定表达荧光观察荧光染料转染试剂工程化上清液体标记构建示踪体外蛋白筛选体内研究

[发明专利]外泌体中核酸分子的检测方法-CN202110496477.3在审
发明人：徐学明;冯韵;田金金;冯菲菲 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2021-05-07 - 公布日： 2021-07-23 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明涉及一种简便快速检测外泌体中核酸分子的方法，其包括裂解样品中的外泌体，用于释放外泌体核酸分子；逆转录反应，其中所述外泌体裂解后不经过提取核酸分子或经过提取核酸分子后进行所有RNA的逆转录反应，即RT‑For‑All，使外泌体中所有RNA在同一反应中同时进行逆转录；其中在所述逆转录反应中使用包含通用接头(例如，miRNA Adapter)和随机引物的逆转录缓冲液。本发明还提供了用于检测外泌体中核酸分子的试剂盒。本方法通过直接溶解外泌体释放内含成分，无需提取RNA和DNA，直接在同一个逆转录反应中进行所有RNA的逆转录。可从微量外泌体中检测出各种RNA和DNA。
外泌体中核酸分子检测方法

[发明专利]一种富含脂肪干细胞外泌体的组合物及其应用-CN202110115511.8在审
发明人：朱学义;刘岩 -专利权人：菲尔生物工程技术有限公司
申请日： 2021-01-28 - 公布日： 2021-04-30 - 主分类号： A61K35/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种富含脂肪干细胞外泌体的组合物及其应用，涉及一种组合物，所述组合物由作为活性成分脂肪干细胞外泌体及至少一种可以皮肤外用的辅料组成，所述作为活性成分脂肪干细胞外泌体的重量百分比用量为0.003％～0.004％，本发明公开了一种富含脂肪干细胞外泌体的培养方法，该方法培养的脂肪干细胞外泌体，状态好，可以获得更高纯度的脂肪干细胞外泌体，得到的脂肪干细胞外泌体效果也明显高于现有的培养方法；本发明所提供的培养基所用添加剂成分简单、价格低廉，易于推广使用；利用本发明培养脂肪干细胞外泌体，可以获得十分优秀的稳定的效果。
一种富含脂肪干细胞外泌体组合及其应用

[发明专利]一种胃靶向载药外泌体及应用和治疗胃部疾病药物-CN202110693265.4在审
发明人：姜海涛;王天怡 -专利权人：姜海涛
申请日： 2021-06-22 - 公布日： 2021-10-22 - 主分类号： A61K47/46 文献下载
摘要：本发明属于生物医药技术领域，为了解决现有的靶向制剂针对胃部疾病的治疗效果不够显著的问题，公开了一种胃靶向载药外泌体及应用和治疗胃部疾病药物，所述胃靶向载药外泌体由用于治疗胃部疾病的药物导入到具有胃组织靶向性的外泌体中获得，所述具有胃组织靶向性的外泌体来源于胰腺细胞。本发明使用胰腺细胞分泌的外泌体不需要作任何修饰就可以在胃部富集，用胰腺细胞分泌的外泌体，解决了外泌体产量的问题，具有很好的应用前景，而且用胰腺细胞分泌的外泌体可以装载不同药物或活性分子，通过靶向胃组织给药
一种靶向载药外泌体应用治疗胃部疾病药物

[发明专利]外泌体分离纯化方法-CN202210500290.0在审
发明人：葛啸虎;王淼;陆路;田应洲;陈巍;杜焕青;韩春乐;王飞;温智钧;高梦雅;王帅 -专利权人：天九再生医学（天津）科技有限公司
申请日： 2022-05-10 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种外泌体分离纯化方法，取含有外泌体的体液或培养液，经过阴离子交换层析、阳离子交换层析和分子筛层析后获得纯化后的外泌体溶液。通过这样的提纯方法即便在大规模的外泌体需求中，也能够低成本、高效率的获得高纯度的外泌体；与现有的外泌体纯化方法如离心法、PEG多聚物沉淀法、亲和层析法、超滤法、分子筛尺寸排阻色谱法相比，本发明可以实现不同体积（100ml至500L）外泌体纯化，尤其杂质蛋白较多的乳源制品，也可获得纯度99%以上的乳源外泌体，同时具有低成本及高回收率的优势，能满足工业化生产的需求。
外泌体分离纯化方法

[发明专利]一种复合外泌体的制备方法及其在定向增强血管生成能力方面的应用-CN202210281021.X在审
发明人：杨桂花;杨海霞;赵进军 -专利权人：和携科技有限公司
申请日： 2022-03-22 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本申请涉及干细胞外泌体的技术领域，具体公开了一种复合外泌体的制备方法及其在定向增强血管生成能力方面的应用。该复合外泌体的制备方法包括以下步骤：细胞培养、制备复合外泌体；所述细胞培养步骤采用的培养基为间充质干细胞无血清培养基；所述间充质干细胞无血清培养基中还包括烟酰胺、N‑正辛基‑D‑葡萄糖胺和医用肝素钠；利用上述复合外泌体的制备方法制得的复合外泌体及其在定向增强血管生成能力方面的应用本申请能够获得一种高含量的人脐带间充质干细胞外泌体，该人脐带间充质干细胞外泌体可以促进血管的生成与分化，增强血管的生成能力。
一种复合外泌体制备方法及其定向增强血管生成能力方面应用

[发明专利]一种负载淫羊藿苷的3D培养间充质干细胞外泌体水凝胶的制备方法和应用-CN202211604725.2在审
发明人：陈勇军;陈光风;黄启彬;李琴 -专利权人：四川康克俞生物科技有限公司
申请日： 2022-12-13 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： A61K9/06 文献下载
摘要：本发明涉及天然生物纳米材料领域，公开了一种负载淫羊藿苷的3D培养间充质干细胞外泌体水凝胶的制备方法和应用，使用海藻酸钠‑透明质酸水凝胶3D培养间充质干细胞，收集间充质干细胞分泌的外泌体；将淫羊藿苷负载至外泌体中，制备复合的淫羊藿苷‑外泌体纳米水凝胶制剂。本发明提供的负载淫羊藿苷的外泌体水凝胶的制备方法，制备工艺简单、高效、成本低；所制备的淫羊藿苷‑外泌体水凝胶治疗大鼠骨关节炎软骨缺损的效应显著高于单独外泌体水凝胶的治疗效果。为开发基于外泌体载送天然活性物质并通过水凝胶缓释给药方式治疗人类骨关节炎提供了重要的参考意义。
一种负载淫羊藿培养间充质干细胞外泌体水凝胶制备方法应用

[发明专利]一种人体血浆外泌体的提取方法及其应用-CN202310420809.9在审
发明人：李凤娟;郭军;胡艺瀚;边宁;陈冬冬 -专利权人：暨南大学附属第一医院（广州华侨医院）
申请日： 2023-04-19 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及一种人体血浆外泌体的提取方法及其应用，属于生物医学技术领域，本发明基于既往传统的高速离心法进行优化改良，提出一种人体血浆外泌体的提取方法，详细提出了快速提取、分离、纯化人体血浆外泌体并定性定量后通过细胞实验证实，心肌梗死病人的外泌体孵育细胞，可以促进心肌细胞炎性反应；高血压血管硬化病人的外泌体孵育细胞，可以诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移；动物实验验证心肌梗死小鼠模型上注射纯化后的健康人群外泌体可以明显改善心肌损伤；而注射心肌梗死人群外泌体可以加重心肌损伤；在血管硬化小鼠模型上注射纯化的健康人群外泌体可以改善血管纤维增生，改善血管重构。
一种人体血浆外泌体提取方法及其应用

[发明专利]一种外泌体靶向缓释微球生物支架及其制备方法和用途-CN201710797006.X有效
发明人：李征宇;龙乾发 -专利权人：李征宇;龙乾发
申请日： 2017-09-06 - 公布日： 2020-08-11 - 主分类号： A61K35/28 文献下载
摘要：本发明提供一种外泌体靶向缓释微球生物支架及其制备方法和用途，包括胶原、分散于胶原中的可降解微球以及结合于该微球上的外泌体。由动物组织中分离胶原；由骨髓或脐带间充质干细胞的培养物中分离外泌体；采用乳化‑交联法制备结合有外泌体的微球；将微球与胶原混合、冷冻干燥。本发明将壳聚糖等高分子材料与外泌体通过微球结构结合起来，并将该微球结构分散至胶原中，形成具有定向释放外泌体功能的生物支架材料，可以显著提高外泌体的靶向修复和治疗作用，且微球结构使得外泌体的释放具有缓释可控特点
一种外泌体靶向缓释微球生物支架及其制备方法用途

[发明专利]脂肪来源间充质干细胞类外泌体的制备方法及应用-CN201910133482.0有效
发明人：刘艳宁;楼国华;郑敏 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-02-22 - 公布日： 2021-03-23 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供一种脂肪来源间充质干细胞类外泌体的制备方法及应用。所述脂肪来源间充质干细胞类外泌体的制备方法，其特征在于，所述制备方法至少包括如下步骤：(1)将脂肪来源的间充质干细胞稀释后进行挤出，得到挤出液；(2)将所述挤出液置于梯度分离液中进行离心，无刹车降速，得到分层的混合液，所述分层的混合液包括上层组分、中间层组分和下层组分；(3)收集中间层组分，混入脂肪来源间充质干细胞外泌体，离心，所得沉淀即为脂肪来源间充质干细胞类外泌体。本发明的脂肪来源间充质干细胞类外泌体的制备方法制得的类外泌体，其制备量远高于传统外泌体；所述的类外泌体具有更好的肝脏疾病治疗效果。
脂肪来源间充质干细胞类外泌体制备方法应用

[发明专利]一种用于改善卵巢早衰的干细胞外泌体复合制剂制备系统-CN202210118697.7有效
发明人：芦福建 -专利权人：美亚宜彬生物科技（北京）有限公司
申请日： 2022-02-08 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12M1/38 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于改善卵巢早衰的干细胞外泌体复合制剂制备系统，包括，子宫内膜干细胞外泌体培养装置，用于将第二代到第八代的子宫内膜干细胞培养成子宫内膜干细胞外泌体，脐带间充质干细胞单细胞悬液培养装置，用于将第二代到第六代的脐带间充质干细胞培养成脐带间充质干细胞单细胞悬液；干细胞外泌体复合制剂装置，用于将脐带间充质干细胞单细胞悬液和子宫内膜干细胞外泌体混合形成干细胞外泌体复合制剂；中控单元，其根据子宫内膜干细胞外泌体蛋白含量对各装置参数进行调节，以使生成的子宫内膜干细胞外泌体蛋白含量符合预设标准
一种用于改善卵巢早衰干细胞外泌体复合制剂制备系统

[发明专利]一种高特异性的外泌体分离、检测及富集方法-CN202010140177.7有效
发明人：毛发江;左玲;任建琳 -专利权人：上海市中医医院
申请日： 2020-03-03 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明涉及生物体检测技术领域，具体是一种高特异性的外泌体分离、检测及富集方法：构建一种只有当外泌体膜上的磷脂双分子层和相应膜蛋白同时存在才能触发的核酸扩增反应，实现高特异性的外泌体检测，并借助磁珠将其富集优点为：1、解决了传统基于适配体或者抗原抗体的外泌体检测方法，在实际应用过程中均有可能被外界环境中游离的外泌体膜蛋白，如CD63蛋白，CD9蛋白等所触发，使得最终所检测的信号并不一定能够完全真是反应外泌体的数量的问题2、显著提高了外泌体检测和分离的特异性，降低了外界环境中游离的外泌体膜蛋白对外泌体检测的干扰，同时保证了外泌体检测的较高灵敏度。
一种特异性外泌体分离检测富集方法

[发明专利]血清或血浆中的外泌体制备试剂盒及外泌体制备方法-CN201810865076.9有效
发明人：李晶;曹洋;马静;辛文 -专利权人：北京全式金生物技术有限公司
申请日： 2018-08-01 - 公布日： 2020-04-10 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开一种血清或血浆中的外泌体制备试剂盒及外泌体制备方法，所述试剂盒包括外泌体提取试剂，所述外泌体提取试剂为亲水聚合物或亲水聚合物的溶液；所述亲水聚合物包括PEG、硫酸葡聚糖、PVP中的一种或几种的组合PEG的分子量为20,000‑1,200,000道尔顿，所述硫酸葡聚糖的分子量为5,000‑20,000道尔顿，所述PVP的分子量为10,000或40,000‑700,000道尔顿，利用该试剂盒得到的外泌体粒径分布更集中；本发明提供的外泌体制备方法还优化了外泌体纯化步骤，使得外泌体的杂质更少，纯度更高。
血清血浆中的体制试剂盒方法