本发明提供一种用于扩增土壤线虫CO I基因的简并引物组合,所述引物组合包括7COX1JB-F1和7COX1JB-R1以及7COX1JB-F2和7COX1JB-R2(如Seq ID No.1-4所示)。本发明利用巢式PCR的方法扩增出土壤线虫的部分COI基因片段,利用该片段可以有效地对土壤线虫进行分类鉴定,对操作人员要求不高,只需熟练PCR操作即可,即使完全没有线虫形态分类鉴定知识的人也可轻松完成,且一次巢式PCR就可以同时完成大量样品的分类鉴定,节约了鉴定时间,与传统方法相比,本发明选择了CO I基因,分辨率更高,可以更有效地对土壤线虫进行种的区分,同时填补了土壤线虫分类鉴定领域的空白。