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[发明专利]一种双元表达载体的构建及应用-CN201811652736.1在审
发明人：张国栋;刘佳音;米铁柱;吴洁芳;李继明;万吉丽 -专利权人：青岛袁策集团有限公司
申请日： 2018-12-29 - 公布日： 2019-04-19 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本申请公开了一种双元表达载体的构建方法，包括以下步骤：(1)获取启动子DNA片段；(2)获取编码DNA片段；(3)将所述步骤1获取得到的启动子DNA片段和所述步骤2获取得到的编码DNA片段转入载体质粒，得到表达载体。本申请双元表达载体的构建方法中，启动子EXP B具有在水稻根系特异启动下游基因表达的特性，通过所述双元表达载体中的启动子EXP B，使得双元表达载体中编码OsHMA3的核苷酸序列在水稻根系中超量表达。
双元表达载体构建启动子DNA片段编码DNA片段水稻根系启动子核苷酸序列表达载体超量表达下游基因载体质粒申请转入应用

[发明专利]一种红曲色素产生菌株构建方法-CN201811581705.1有效
发明人：龙传南;曾斌;陶琴琴;刘心怡;刘梦梦;彭玲;程芳婷;王淑琴;吾蔚蔚 -专利权人：江西科技师范大学
申请日： 2018-12-24 - 公布日： 2021-08-06 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：该技术方案首先将一对依次含有Hind III、Kpn I、Sac I、Pac I、Pme I、Xho I、Xba I、Bgl II酶切位点的寡核苷酸序列与植物双元质粒pCambia0380连接，构建得到双元质粒表达载体pCambia0380G；而后，将hph表达盒片段与之连接，获得双元质粒敲除载体pHph0380；在此基础上，分别扩增gltp1基因的上、下游同源臂片段，连接至双元质粒敲除载体pHph0380上，从而获得双元质粒敲除载体将该载体pHph0380‑GLTP由根癌农杆菌EHA105介导转化至亲本红色红曲霉CICC41233中，完成高产菌株的构建。
一种红曲色素产生菌株构建方法

[发明专利]一种黄曲霉菌遗传转化表达载体的构建方法-CN201310182865.X无效
发明人：陶芳;范军;储韬;张心雨;魏洪璇 -专利权人：安徽农业大学
申请日： 2013-05-16 - 公布日： 2013-07-31 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明构建了一种适合于黄曲霉菌遗传转化的表达载体，它包括以下两个步骤：一）含筛选标记基因和红色荧光报告基因的融合基因表达盒的供体质粒的构建：1）选择合适的供体骨架载体，2）设计引物，3）基因融合，4）构建含融合基因表达盒的供体载体；二）将融合基因表达盒克隆到双元表达载体上：1）双元表达载体的改造，2）将融合基因表达盒插入改造后的双元表达载体。本发明的载体转化黄曲霉菌后，可同时进行抗性和红色荧光筛选重组菌，提高筛选效率；还可利用红色荧光监测黄曲霉菌对农作物、食品的侵染，为这一危害人类健康的产毒真菌的防治提供依据。
一种黄曲霉菌遗传转化表达载体构建方法

[发明专利]一种利用月季瞬时表达系统鉴定蛋白互作的方法-CN201710259815.5有效
发明人：王长泉;刘金义;陆俊;任浩然;白梦娟 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2017-04-20 - 公布日： 2019-08-09 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用月季瞬时表达系统鉴定蛋白互作的方法，包括如下步骤：（1）提取含有目的基因的入门载体质粒；（2）将含有目的基因的入门载体质粒分别和含有萤火虫荧光素酶基因N端、C端的双元表达载体进行LR重组反应，提取质粒；（3）将LR反应后得到的含有目的基因和萤火虫荧光素酶基因片段的重组质粒转化农杆菌，制备转化液；（4）取继代培养1个月的月季无菌苗转移到上述所得转化液中，真空渗透3～5分钟，然后用无菌水清洗后将月季苗放回到继代培养基中培养
一种利用月季瞬时表达系统鉴定蛋白方法

[发明专利]一种快速高效的植物人工微RNA表达载体构建方法-CN200710053563.7有效
发明人：马立新;严红 -专利权人：湖北大学
申请日： 2007-10-16 - 公布日： 2009-02-18 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提出了一种快速高效的植物人工微RNA(amiRNAs)表达载体构建方法，它是通过以下两大步骤完成的。一)含amiRNAs表达单元的供体质粒的构建：1)选择并改造供体骨架载体，2)引物设计，3)PCR扩增，4)同源重组转化筛选；二)将amiRNAs表达单元克隆到植物双元载体上：1)选择并改造受体载体，2)采用接合辅助的遗传整合克隆方法将amiRNAs表达单元克隆到植物双元载体上，验证重组子，选出植物amiRNAs表达载体。在改造供体骨架载体和受体载体时，分别克隆了筛选标记基因或报告基因表达单元和大肠杆菌条件致死基因表达单元。本发明不需要酶切连接反应，也不需要对载体或目的片段进行特殊处理，整个过程操作简单方便，实验周期短，重组效率高，能够快速、高效、零背景、高通量地构建植物amiRNAs表达载体。
一种快速高效植物人工 rna 表达载体构建方法

[发明专利]质粒系统-CN202080039790.8在审
发明人： M·霍莱尔;F·桑塔格;R·科伯 -专利权人：自由行疗法有限公司
申请日： 2020-04-14 - 公布日： 2022-01-04 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：本发明涉及用于生产重组AAV(rAAV)载体的双质粒系统、辅助质粒和/或载体质粒。本发明进一步涉及使用本发明的双质粒系统、辅助质粒和/或载体质粒的方法或其用途。
质粒系统

[发明专利]一种大肠杆菌-酵母-农杆菌三元穿梭载体及其在植物病毒侵染性克隆中的应用-CN202211258827.3在审
发明人：张坤;郭枭;陈佳欢;贺振;顾天潇 -专利权人：扬州大学
申请日： 2022-10-14 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了一种大肠杆菌‑酵母‑农杆菌穿梭载体及其在植物病毒侵染性克隆中的应用。所述大肠杆菌‑酵母‑农杆菌穿梭载体是基于大肠杆菌‑农杆菌的双元穿梭载体的改造，即增加酵母DNA，复制起始识别序列和酵母色氨酸合成酶筛选标记基因片段，将携带酵母复制元件2μ序列及筛选标记基因序列的目的基因片段插入到大肠杆菌‑农杆菌双元质粒骨架中，构建了两个大肠杆菌‑酵母菌‑农杆菌三元穿梭质粒，该质粒可以在酵母细胞、大肠杆菌细胞和农杆菌细胞中稳定遗传和增殖。
一种大肠杆菌酵母杆菌三元穿梭载体及其植物病毒侵染克隆中的应用

[发明专利]一种重组质粒及其用于构建红曲色素高产菌株的方法-CN201711063759.4有效
发明人：龙传南;曾斌;张冬生;谢韶斌 -专利权人：江西科技师范大学
申请日： 2017-11-02 - 公布日： 2021-07-13 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组质粒及其用于构建红曲色素高产菌株的方法，该技术方案首先从植物双元质粒pCambia0380载体出发，改造并构建了一种适合丝状真菌表达的双元质粒载体pNeo0380。在此基础上，从米曲霉中克隆得到α‑淀粉酶基因，与质粒载体连接后，通过根癌农杆菌EHA105介导将其转化至野生型的红色红曲霉中，构建得到了红曲色素高产菌株，该菌株可显著促进底物大米淀粉的降解，从而提高红曲色素产量
一种重组质粒及其用于构建红曲色素高产菌株方法

[发明专利]一种含HIPK2基因的重组质粒-CN201110217195.1无效
发明人：周利红;李琦;范忠泽;王炎;殷佩浩;慈书俊;周宁 -专利权人：上海中医药大学附属普陀医院;上海市普陀区中心医院
申请日： 2011-08-01 - 公布日： 2011-12-14 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及一种含HIPK2基因的重组质粒，该重组质粒包含HIPK2基因的编码序列以及载体质粒DNA序列。其中载体质粒DNA序列包含与HIPK2基因可操作地连接的调节序列，该载体质粒是可以在宿主中复制和生存的真核表达质粒。该重组质粒的构建包括引物设计、PCR扩增、NheI和KpnI双酶切及纯化、目的片段和载体质粒的连接、连接产物转化大肠杆菌感受态细胞以及重组质粒酶切鉴定阳性克隆并测序等步骤。该重组质粒可用于HIPK2基因在肿瘤血管新生、增殖凋亡、侵袭转移中的作用机理的研究，以及基于HIPK2基因的抗肿瘤药物的开发和生产，从而提供预防和治疗肝癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的新途径。
一种 hipk2 基因重组质粒

[发明专利]鸡AID过表达载体质粒的构建方法及应用-CN201710928612.0在审
发明人：崔恒宓;贾崇信;陈世豪;胡序明;刘宗平 -专利权人：扬州大学
申请日： 2017-10-09 - 公布日： 2018-01-05 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种鸡AID过表达载体质粒的构建方法及应用。本发明提供了用于鸡AID过表达载体质粒构建的引物ch‑AID‑F1和ch‑AID‑R1，及鸡AID过表达载体质粒构建方法，也提供了鸡AID表达荧光定量PCR检测试剂盒，为鸡AID的功能研究及其应用提供了方法和基础本发明还公开了鸡AID过表达载体质粒在制备抗病毒药物中的应用。
aid 表达载体质粒构建方法应用

[发明专利]一种快速构建高表达稳定性细胞株的方法-CN201310743883.0有效
发明人：陈倩怡;王笑非 -专利权人：佛山安普泽生物医药有限公司
申请日： 2013-12-30 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种快速构建高表达稳定性细胞株的方法，步骤如下：（1）构建Gal4-VP16融合蛋白的表达载体质粒；（2）构建UAS-目标基因蛋白的表达载体质粒；（3）将上述Gal4-VP16融合蛋白的表达载体质粒和UAS-目标基因蛋白的表达载体质粒转导进入宿主细胞；（4）选择筛选目标基因的稳定表达细胞株；（5）扩增；（6）获得高表达稳定细胞株。
一种快速构建表达稳定性细胞株方法

[发明专利]一种玉米新型高效无选择标记转基因载体系统构建方法及应用-CN201510222087.1在审
发明人：钱叶雄;席贻龙 -专利权人：安徽师范大学
申请日： 2015-05-04 - 公布日： 2015-08-12 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明提供一种玉米新型高效无选择标记转基因载体系统构建方法及应用，采用PCR克隆技术从玉米高活性的Mu品系中获得Mu转座子的相关片段，以双元质粒载体pCAMBIA1300为骨架，分别构建新型高效的双元质粒载体本发明能够提高转基因的转化效率，该载体系统的获得将为今后直接获得无标记基因、生物安全的转化体，尤其可为玉米、水稻等重要粮食作物的无标记基因转化提供可靠、有效的工具，具有重要的理论意义和应用价值。
一种玉米新型高效选择标记转基因载体系统构建方法应用

[发明专利]一种愈伤组织阶段的筛选方法-CN201810734304.9在审
发明人：刘佳音;米铁柱;张国栋;李继明;万吉丽;徐春莹 -专利权人：青岛袁策集团有限公司
申请日： 2018-07-05 - 公布日： 2018-12-18 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本申请公开了一种愈伤组织阶段的筛选方法，以商业化的pCAMBIA1300双元载体质粒为模板，通过利用35S‑F 5′gggactctagaggatccTGGTGGC‑3′；35S‑R 5′AAGCTCCGAGGAGGTTTCCGGATA
愈伤组织阶段筛选报告基因检测双元载体质粒植物转基因酶切位点阳性植株高效率转基因扩增观察申请成功

[发明专利]具备双向启动子诱捕及质粒拯救功能的双元Ti质粒及其构建方法-CN201310162982.X有效
发明人：邓晟;林玲;王彩月;张昕;周益军 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2013-05-07 - 公布日： 2014-01-22 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明涉及一种植物及部分真菌T-DNA转化和T-DNA插入突变体库构建所使用的双元Ti质粒载体及其构建方法。首先，在质粒T-DNA区的两端都整合了绿色荧光蛋白报告基因sGFP的启动子捕获模块，并对两端sGFP开放阅读框之前的核酸序列进行了优化调整；其次，质粒拯救的功能模块也通过酶切位点整合到目标质粒中；最后，质粒整合了用于筛选转化子的潮霉素抗性基因，并且该基因及其启动子可以通过Sac I酶切位点进行自由替换，以适应不同的筛选目的和物种。双元Ti质粒载体的选择及其各模块的配置和优化会对转基因的效率、基因克隆及相关基因功能验证的便利性产生很大的影响。通过将多种质粒功能模块有机的整合到一个质粒上，既扩大了质粒的适用范围，又提高了筛选及克隆目标功能基因的效率，为找寻有益基因及其功能验证提供了一个很好的分子工具。
具备双向启动子诱捕质粒拯救功能 ti 及其构建方法

[发明专利]一种向莴苣叶绿体中导入外源DNA的方法以及用于该方法的莴苣叶绿体DNA片段-CN01129515.5无效
发明人：胡赞民;石锐;杨晨敏;陈正华 -专利权人：中国科学院遗传研究所
申请日： 2001-06-22 - 公布日： 2004-07-07 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：NO：2所示序列或者包括SEQ ID NO：2所示序列3’端的不小于1kb的片段、SEQ ID NO：3所示序列或者包括SEQ ID NO：3所示序列5，端的不小于1kb的片段、外源DNA片段以及一种载体质粒来构建一个重组载体质粒，并使插入到载体质粒上的外源DNA片段位于所述的两个片段之间；利用所构建的重组载体质粒DNA转化莴苣细胞；培养转化的细胞成为植株。
一种莴苣叶绿体导入 dna 方法以及用于片段

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