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[发明专利]一种提高心梗疗效的外泌体及应用-CN201810994349.X在审
发明人：胡新央;王建安;钟淑涵;李庆举 -专利权人：浙江大学
申请日： 2018-08-29 - 公布日： 2019-01-25 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开一种提高心梗疗效的外泌体及应用，所述外泌体按如下方法制备：将传代稳定的骨髓间充质干细胞于无血清培养基中，在37℃、CO₂体积浓度5％、氮气体积浓度95％的混合气体中培养1～2天，收取培养上清液，通过超速离心法提出外泌体。本发明小鼠心梗后进行外泌体心肌内注射治疗后，可以明显改善心功能以及心脏的不利重塑，从而改善心梗的预后。
心梗骨髓间充质干细胞传代氮气无血清培养基超速离心法培养上清液混合气体预后小鼠心肌制备应用注射心脏治疗

[发明专利]一种外泌体的制备方法-CN202211552943.6在审
发明人：翟艳华;杨诗逸;王晓煜;何新军;许可 -专利权人：苏州唯思尔康科技有限公司
申请日： 2022-12-05 - 公布日： 2023-02-24 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种外泌体的制备方法，其包括以下步骤：1)采用切向流过滤方法浓缩细胞上清液得到浓缩液；2)采用全能核酸酶对浓缩液进行去核酸处理并经重悬得到粗提液；3)对粗提液进行密度梯度离心，收集外泌体层；4)在离心力小于等于50000g的条件下对外泌体层进行低速离心，去除沉淀得到初步纯化液；5)在离心力大于等于100000g的条件下对初步纯化液进行超速离心，所得沉淀即为外泌体。本发明方法获得的外泌体，其膜结构完整、不变形，纯度和颗粒浓度更高，相比现有方法制备的外泌体质量更好，同时本发明方法收率高、成本低，本发明方法有助于实现外泌体的工业化制备，为以外泌体为载体的靶向药递送研究提供有力的支撑
一种外泌体制备方法

[发明专利]一种树突状细胞外泌体肝癌疫苗制备方法-CN202310700548.6在审
发明人：李伟华;马迎民;罗淑敏;李传云;肖俐;徐芳;陈静 -专利权人：首都医科大学附属北京佑安医院;北京肝病研究所
申请日： 2023-06-14 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： A61K39/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种树突状细胞外泌体作为肝癌疫苗的制备方法，从成熟后的树突状细胞(DC)培养上清中提取出外泌体，制备肝癌免疫治疗的外泌体疫苗。本发明中的DC外泌体疫苗负载肝癌特异性短肽hAFP158‑166、hGPC3144‑152、增强树突状细胞的免疫原性的该DEX疫苗结合了DC疫苗和外泌体的双重优势，可用于肝癌免疫治疗，为改善基于树突状细胞的免疫疗法提供了途径。
一种树突细胞外泌体肝癌疫苗制备方法

[发明专利]一种脐带间充质干细胞外泌体的制备方法及在干细胞美容、抗衰、修复和疾病治疗中的应用-CN201910683111.X在审
发明人：不公告发明人 -专利权人：南京温博生物科技有限公司
申请日： 2019-07-26 - 公布日： 2019-10-11 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种脐带间充质干细胞外泌体的制备方法及在干细胞美容、抗衰、修复和疾病治疗中的应用，制备方法包括：取hUC‑MSCs用含有大豆卵磷脂的完全培养基培养，收集细胞、洗涤，再用无血清α‑MEM培养基重悬，饥饿处理后收集上清，依次用300×g离心10min和29500×g离心20min再次收集上清，使用0.22μm滤膜过滤，最后120000×g离心1.5h收集沉淀，将沉淀用适量PBS重悬后，‑80℃保存本发明制备方法在维持外泌体纯度(以外泌体特异性跨膜蛋白CD9和CD81的含量为指标)基本不变的前提下，可以显著提高脐带间充质干细胞外泌体的分泌量，可用于干细胞美容、抗衰、修复或疾病治疗。
脐带间充质干细胞制备疾病治疗干细胞美容修复重悬沉淀大豆卵磷脂完全培养基饥饿处理跨膜蛋白滤膜过滤无血清可用分泌洗涤应用细胞保存

[实用新型]一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管-CN202022535894.8有效
发明人：周卿 -专利权人：华夏源细胞工程集团股份有限公司
申请日： 2020-11-05 - 公布日： 2021-10-26 - 主分类号： B01D61/14 文献下载
摘要：本实用新型涉及分子生物学及临床检验技术领域，具体是一种结合超滤法和超速离心法的外泌体提取离心管，包括管体、管盖和管体内的超滤膜。超滤膜呈倒圆锥形置于所述管体内，超滤膜顶部嵌入管体底部的凹槽；管体内壁设有固定所述超滤膜上沿的凸起。通过结合超速离心法和超滤法，将超滤膜设置为倒圆锥形进行细胞上清液离心来提取外泌体，简化了管体的结构和外泌体提取的步骤，提高了外泌体提取效率。
一种结合超滤超速离心外泌体提取离心管

[发明专利]富血小板血浆来源性外泌体的分离方法及其应用-CN202110244215.8在审
发明人：韩雷;胡云根;方伟利;汪灿锋 -专利权人：杭州市萧山区中医院
申请日： 2021-03-05 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明提供了一种富血小板血浆来源性外泌体的分离方法，属于外泌体提取技术领域。它包括以下步骤：1)将第一离心管体安装于套管内，添加血小板样本；离心后，从弃去滤芯上侧液体；2)打开出液阀门，将滤芯下侧液体转移到第二离心管中；3)向第二离心管加入1.0‑1.5g/ml蔗糖溶液，静置后离心，弃去上清液，加入PBS缓冲液；4)再次离心，弃去上清液并，取剩余液体备用。本发明使用密闭的离心管进行分离，保障了在无菌条件下提取富血小板血浆来源性外泌体，提高了提取过程的效率。还提供了以上方法得到的富血小板血浆来源性外泌体在诱导肌腱干细胞增殖分化中的应用，以及在制备治疗腱骨愈合的组合物中的应用。
血小板血浆来源性外泌体分离方法及其应用

[发明专利]一种依帕司他在制备胰腺癌药物中的应用及对胰腺癌细胞分泌外泌体的抑制作用的验证方法-CN201910310233.4在审
发明人：肖明兵;焦钰洁;季洁;范义辉;邰伯军;谭忠华;倪温慨;陈晓君;纪易斐 -专利权人：南通大学附属医院
申请日： 2019-04-17 - 公布日： 2019-07-26 - 主分类号： A61K31/426 文献下载
摘要：本发明提供一种依帕司他在制备胰腺癌药物中的应用，胰腺癌药物应用于抑制胰腺癌细胞的外泌体分泌。一种抗胰腺癌的药品组合物，药品组合物含有依帕司他。所述药品组合物应用于抑制胰腺癌细胞的外泌体分泌。本发明的实施例还提供一种依帕司他对胰腺癌细胞分泌外泌体的抑制作用的验证方法，包括以下过程：利用低温超速离心法提取细胞上清外泌体；将收集的外泌体裂解后用BCA试剂盒定量蛋白，用测得的蛋白量来反映外泌体的量；透射电镜验证外泌体的双层脂质膜包裹的杯状结构；蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝检测外泌体蛋白浓度。本发明中提供了依帕司他有一个新的用途，即抑制外泌体分泌，依帕司他在临床肿瘤治疗中有巨大的应用潜力。
依帕司他分泌胰腺癌细胞胰腺癌药品组合物验证制备蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白应用超速离心法考马斯亮蓝杯状结构抗胰腺癌临床肿瘤双层脂质透射电镜药物应用应用潜力蛋白量膜包裹裂解细胞检测治疗

[发明专利]一种成体肺干细胞外泌体及其制备方法和应用-CN202210080879.X在审
发明人：左为;张婷 -专利权人：同济大学;苏州吉美瑞生医学科技有限公司
申请日： 2022-01-24 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明涉及一种干细胞外泌体，具体涉及一种成体肺干细胞外泌体及其制备方法和应用，包括如下步骤：S1：将肺干细胞接种并进行培养，至密度达50‑90％融合时，收集肺干细胞；S2：将收集到的肺干细胞进行传代培养，待细胞生长至密度达60‑100％融合时，弃去培养基并洗涤，加入外泌体收集液培养；S3：收集培养得到的含外泌体的收集液并过滤；S4：混合过滤后的收集液和PEG溶液，静置过夜；S5：将外泌体‑PEG混合液离心，弃去上清液，经重悬后，得到成体肺干细胞外泌体。与现有技术相比，本发明制备了一种能够有效治疗慢性阻塞性肺病的成体肺干细胞外泌体，并通过结合雾化治疗的方式，得到了良好的治疗效果。
一种成体干细胞外泌体及其制备方法应用

[发明专利]一种外泌体及外泌体RNA串联富集鉴定方法-CN202310083048.2在审
发明人：秦伟捷;张宝英 -专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院;北京蛋白质组研究中心
申请日： 2023-02-08 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明公开了一种外泌体及外泌体RNA串联富集鉴定方法。包括如下步骤：将TiO2微球与生物样本共同孵育以捕获生物样本中的外泌体，清洗去除非特异性吸附，得到表面附着有外泌体的TiO2微球；加入裂解/结合缓冲液，裂解外泌体使其释放内容物，继续孵育，使外泌体释放的RNA结合到TiO2上，清洗去除非特异性吸附，完成生物样本中exoRNA的富集，最后加入洗脱液将exoRNA洗脱下来，离心收集上清液即可。从外泌体富集，到exoRNA的释放，再到exoRNA的富集，整个过程仅需30min；同时裂解液中包含多种抑制RNase活性的成分，保证得到高质量exoRNA。
一种外泌体 rna 串联富集鉴定方法

[发明专利]从玫瑰花中提取玫瑰花精华液和外泌体的方法及应用-CN201811548400.0在审
发明人：刘伟图;王一;曹洁;许晖;郑梦琳;姜小渊 -专利权人：王一;至爱芳邻（武汉）科技有限公司;湖北中谷正和农业发展有限公司
申请日： 2018-12-18 - 公布日： 2019-04-05 - 主分类号： A61K36/738 文献下载
摘要：本发明提供了一种从玫瑰花中提取玫瑰花精华液和外泌体的方法及应用。该方法包括如下步骤：将玫瑰花浸泡在生理盐水或PBS中，匀浆，在500～5000g下离心20～40min取第一上清液，将所述第一上清液在10000～15000g下离心80～120min取第二上清液，将所述第二上清液在80000～130000g下离心80～120min，取上清液，得到玫瑰花精华液。本发明得到的玫瑰花外泌体和玫瑰花精华液可以激活皮肤再生，增强皮肤增殖、分化能力，进而调整生理性修复，促进损伤修复。
玫瑰花精华液上清液分化能力皮肤再生皮肤增殖取上清液生理盐水损伤修复匀浆浸泡应用激活修复

[发明专利]基于发夹核酸分子信号放大线路的外泌体检测方法及应用-CN202011426669.9有效
发明人：王晓琨;丛昊洁;马翠萍 -专利权人：青岛科技大学
申请日： 2020-12-09 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： G01N33/574 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于发夹核酸分子信号放大线路的外泌体检测方法及其应用，属于生物检测技术领域。将羧基修饰的磁性纳米颗粒的羧基活化后与外泌体特异性识别抗体孵育，得到外泌体特异性识别抗体修饰的磁性纳米颗粒，加入外泌体样品，磁性分离后与携带启动核酸序列的双胆固醇分子锚孵育得到嵌入外泌体脂质双分子层膜的启动核酸序列，此启动核酸序列诱导发卡结构H1、发卡结构H2进行核酸扩增，H1、H2扩增产物与FQ荧光探针特异性杂交，荧光基团释放到溶液环境中，磁铁分离得上清液检测荧光信号。本方法能够特异性捕获、分离体液中外泌体；通过无酶催化发夹组装信号放大策略，实现外泌体高灵敏检测。
基于发夹核酸分子信号放大线路体检方法应用

[发明专利]利用蛋白交联纳米亲和微球提取纯化干细胞外泌体制备方法及应用-CN202110154723.7有效
发明人：张海心 -专利权人：瑞太生物科技（沈阳）有限公司
申请日： 2021-02-04 - 公布日： 2022-11-04 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用蛋白交联纳米亲和微球提取纯化干细胞外泌体的方法及应用，所述方法包括：将预处理后的干细胞培养液加入链霉亲和素偶联的纳米羧基硅胶微球，再加入亲和液，反应1h‑5h后离心分离，得到沉淀物，将所述沉淀物洗涤后，最后加入洗脱液洗脱，离心得到含干细胞外泌体的上清液。本发明的蛋白交联纳米亲和微球对各种干细胞来源的外泌体提取纯化，该方法操作方便，耗时短，提取效率高，获得的外泌体纯度高，产量多，还能保证其生物学活性及完整性。该方法制备的干细胞外泌体用于外泌体相关的技术开发及转化应用，包括外泌体载药、外泌体靶向治疗(包括急性呼吸窘迫症，呼吸道感染，哮喘及阿默茨海默症等)，及创面修复及医学美容类应用等。
利用蛋白交联纳米亲和提取纯化干细胞体制方法应用

[发明专利]疾病治疗、预防与保健的外泌体、药物载体及提取方法-CN201910593799.2在审
发明人：巫贵成 -专利权人：巫贵成
申请日： 2019-07-03 - 公布日： 2019-09-13 - 主分类号： A61K9/127 文献下载
摘要：本发明属于中药技术领域，公开了一种疾病治疗、预防与保健的外泌体、药物载体及提取方法，所述疾病治疗、预防与保健的外泌体、药物载体来自于中药。取中药捣烂研磨4摄氏度高速搅拌，收集汁分别在2000g离心和10000g离心，去除残渣；用150000g离心，用PBS洗涤一次，用梯度分别为8％、30％、45％和60％的蔗糖进行纯化和分离；上清液离心后，再150000×g离心；8％/30％层和30％/45％层之间的条带分别被采集并记录为外泌体样囊泡，经电镜检测、粒径检测等确认为中药外泌体并将其应用于健康产业。本发明提取了中药外泌体或通过中药外泌体携带药物应用于健康产业，包括疾病治疗、预防的药品和健康保健品的研发。
疾病治疗中药药物载体健康产业预防中药技术领域健康保健品电镜检测高速搅拌粒径检测药物应用研磨蔗糖上清液囊泡条带研发去除采集携带记录应用

[发明专利]用于皮肤抗衰老间充质干细胞外泌体组合物的制备方法及产品和应用-CN202111507419.2在审
发明人：崔大祥;张文桦 -专利权人：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
申请日： 2021-12-10 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： A61K8/99 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法及其产品和应用，脐带来源的间充质干细胞的培养:正常进行细胞培养、消化、传代；脐带来源的间充质干细胞外泌体的获取:收集脐带来源的间充质干细胞培养液上清，进行离心和超滤浓缩，得干细胞外泌体；抗氧化剂的混合：脐带来源的间充质干细胞外泌体与抗氧化剂物理混合。本发明所述脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物中含有脐带来源的间充质干细胞外泌体和抗氧化剂，具有降低细胞内活性氧含量，促进细胞增殖及抗细胞衰老的作用，可在抗衰老方向的化妆品中应用。
用于皮肤衰老间充质干细胞外泌体组合制备方法产品应用

[发明专利]一种GMP车间提取外泌体向流过滤系统及冻干粉制备方法-CN202210942140.5在审
发明人：李立;吴笛笛;刘丕菊;张静;甘宁;陈佳佳;高强 -专利权人：多莱泌生物科技（武汉）有限公司
申请日： 2022-08-08 - 公布日： 2022-10-04 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供一种GMP车间提取外泌体向流过滤系统及冻干粉制备方法，所述制备方法包括以下步骤：1)将间充质干细胞收集上清液、除杂、TFF过滤，得到的滤液为间充质干细胞外泌体溶液；2)配置冻干液；3)将步骤1)所述间充质干细胞外泌体溶液、步骤2)所述冻干液按照比例混合，将所述混合溶液分装到西林瓶中，预冷冻后进行真空冷冻干燥，得到冻干粉，通过冻干粉常温存放半年溶解后与提取直接常温，‑80℃存放进行对比，结果显示，冻干粉相比低温保存基本无降解，而不加保护剂的外泌体常温保存已无外泌体基本破裂，粒径偏小且颗粒数在30‑150nm降解几百倍，证明冻干粉可以常温下维持外泌体颗粒大小。
一种 gmp 车间提取外泌体流过系统干粉制备方法