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[发明专利]一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法-CN201710626400.7在审
发明人：朱英;杨海琼;李裕冬;熊铁一 -专利权人：四川省自然资源科学研究院;中国大熊猫保护研究中心
申请日： 2017-07-27 - 公布日： 2017-09-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法。本发明一套大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法，大致包括1）提取基因组DNA；2）评估原始引物（单对引物）扩增产物的片段大小；3）设计并优化三重PCR引物组合；4）三重PCR扩增及条件优化；5）基因分型效果检测并确定最终组合方式本发明大熊猫微卫星位点的三重PCR体系检测方法简单，与大熊猫常规的微卫星PCR体系相比，节约66.7%的DNA样本、66.7%的成本、效率提高了200%。
一套大熊猫卫星三重 pcr 体系检测方法

[发明专利]同时检测TMV、CMV和PVY的三重荧光定量PCR方法-CN202310563639.X在审
发明人：白静科;陈玉国;邱睿;吴彦辉;牛龙龙;张生杰;王京;李小杰;赵钧;李成军;李淑君 -专利权人：河南省农业科学院烟草研究所
申请日： 2023-05-18 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明涉及一种同时检测TMV、CMV和PVY的三重荧光定量PCR方法，分别以TMV、CMV和PVY的重组质粒标准品为模板做单重荧光定量PCR反应，然后逐渐增加反应重数，并利用矩阵法对引物和探针浓度进行优化，建立荧光定量PCR最佳反应体系；三重荧光定量PCR标准曲线的建立Ct值同质粒标准品浓度之间线性关系良好，利用建立的三重荧光定量PCR检测方法对不同样品进行检测，结果显示，该方法特异性较强。重复性试验结果表明，建立的三重荧光定量PCR方法重复性与稳定性良好。
同时检测 tmv cmv pvy 三重荧光定量 pcr 方法

[发明专利]一种三重RT-PCR特异性扩增引物组及三重鉴定的RT-PCR检测方法-CN201710749394.4有效
发明人：郭晶;李旭勇;刘文强;李玉保 -专利权人：聊城大学
申请日： 2017-08-28 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种三重RT‑PCR特异性扩增引物组及三重鉴定的RT‑PCR检测方法。本发明的三重RT‑PCR特异性扩增引物组用于快速鉴定H6亚型及两种不同NA亚型AIV，所述三重RT‑PCR特异性扩增引物组包括三组引物对，所述三组引物对为：第一引物对A、第二引物对B和第三引物对C，所述第一引物对A包括A1‑UP和A1‑LOW，所述第二引物对B包括B1‑UP和B1‑LOW，所述第三引物对C包括：C1‑UP和C1‑LOW。本发明的三重RT‑PCR特异性扩增引物组可以同时鉴别H6亚型和两种不同NA亚型禽流感病毒(Avian influenza virus，简称AIV)。发明人对三重RT‑PCR检测方法进行优化，使灵敏度提高到100EID50/100μl，检测时间缩短至1.5小时，而且特异性强
一种三重 rt pcr 特异性扩增引物鉴定检测方法

[发明专利]牛猪鸭三重荧光PCR检测引物探针及试剂盒与检测方法-CN201910080372.2在审
发明人：吴凡;陈芝娟;王虹军;贺贤汉 -专利权人：杭州博日科技有限公司
申请日： 2019-01-28 - 公布日： 2019-05-14 - 主分类号： C12Q1/6888 文献下载
摘要：本发明公开了牛猪鸭三重荧光PCR检测引物探针及试剂盒与检测方法，利用3对扩增引物BOS‑F/BOS‑R、SUS‑F/SUS‑R和Anas‑F/Anas‑R，以及对应的3条探针BOS‑probe、SUS‑probe和Anas‑Probe形成牛猪鸭源成分三重荧光PCR检测反应体系，并建立牛猪鸭三重荧光PCR检测方法。
荧光PCR检测检测引物探针试剂盒扩增引物灵敏度探针

[发明专利]一种检测牛、羊、猪源性成分的三重实时荧光PCR方法-CN201710052775.7有效
发明人：孙端方;李春宇;田志强;董睿;寻思颖;罗绍楠;刘廷菊 -专利权人：贵州省产品质量检验检测院
申请日： 2017-01-24 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12Q1/6888 文献下载
摘要：检测牛、羊、猪源性成分的三重荧光PCR方法，具有样品DNA、一对通用引物和三条探针、荧光PCR预混液、阳性对照等4个要素；根据牛、绵羊和山羊、猪的甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶基因设计引物和探针，对目标序列进行扩增并激发和淬灭荧光信号，对非目标序列无扩增和荧光信号；将待测样品DNA进行荧光PCR扩增的试剂配方和扩增条件制成试剂盒；具体做法包括：建立检测牛、羊、猪源性成分的三重荧光PCR引物体系；建立检测牛、羊、猪源性成分的三重荧光PCR试剂盒；确定检测牛、羊、猪源性成分的三重荧光PCR鉴定方法。
一种检测猪源性成分三重实时荧光 pcr 方法

[发明专利]一种禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物及其应用-CN202110114063.X在审
发明人：张喜懿;温贵兰;陈广存;张小波 -专利权人：贵州大学
申请日： 2021-01-27 - 公布日： 2021-04-23 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物，所述检测引物包括分别用于检测禽白血病病毒A、B和J亚群的引物。本发明还公开了禽白血病病毒A/B/J亚群三重PCR检测引物在禽白血病病毒检测中的应用。本发明建立的三重PCR方法可同时检测ALV A、B、J三个亚群，该方法临床试验检测结果与单重RT‑PCR检测结果一致，且具有操作简单、节约成本、特异性高、稳定性好的优点，可为临床上快速鉴别ALV A、B
种禽白血病病毒三重 pcr 检测引物及其应用

[发明专利]一种用于检测猪圆环病毒三重数字PCR的检测方法-CN202310374090.X在审
发明人：朱凤;张翩;宋燕婷 -专利权人：广州阿凡提生物技术有限公司
申请日： 2023-04-08 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开一种用于检测猪圆环病毒三重数字PCR的检测方法，涉及数字PCR的检测领域。该用于检测猪圆环病毒三重数字PCR的检测方法包括材料的准备、样本稀释、检验操作、反应体系配置、数字PCR反应和数据分析等步骤。该用于检测猪圆环病毒三重数字PCR的检测方法，具有更高的检测灵敏度，核酸定量实现无需标准品，也不依赖于标准曲线，采用终点PCR信号计数检测不依赖于Ct值，从而避免了由于标准品与样品基质不同产生的定量误差，能有效克服PCR抑制剂的影响，是一种更加理想的进行基因扩增检测和核酸定量分析的新方法。
一种用于检测圆环病毒三重数字 pcr 方法

[发明专利]用于快速检测三种鱼类病毒的PCR引物组及其应用-CN202011478208.6有效
发明人：梁红茹;马赛亚;付小哲;李宁求;林强;刘礼辉;牛银杰;罗霞;黄志斌 -专利权人：中国水产科学研究院珠江水产研究所
申请日： 2020-12-15 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开一种用于快速检测三种鱼类病毒的三重PCR引物组及其应用，涉及基因检测技术领域；本发明公开一种用于快速检测三种鱼类病毒的三重PCR引物组，包括传染性脾肾坏死病毒ISKNV引物、鳜鱼蛙病毒SCRIV引物和鳜弹状病毒SCRV引物；所述三重PCR引物组具有高灵敏度，检出时间上也要比常规PCR提早2‑3小时，大大提高了临床诊断的效率，可为ISKNV、SCRIV和SCRV这三种病毒感染的流行病学调查提供更为丰富的参考依据
用于快速检测鱼类病毒 pcr 引物及其应用

[发明专利]中国明对虾微卫星三重PCR家系识别技术-CN200510042402.9无效
发明人：孔杰;高焕 -专利权人：孔杰;高焕
申请日： 2005-01-25 - 公布日： 2005-10-12 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：利用三个微卫星引物，通过调整PCR反应体系，以及利用Touch－down的PCR反应程序，获得了三个微卫星引物可以在一个PCR反应体系中同时稳定扩增的参数，进而建立了一个三重PCR技术。此三重PCR技术的非父排除率为0.9679，个体识别力高达0.999327，可以对中国明对虾不同家系进行区分或者进行个体间的识别和鉴定。
中国对虾卫星三重 pcr 家系识别技术

[发明专利]一种三重荧光定量PCR的方法-CN202310197648.1在审
发明人：朱凤;宋燕婷;李海涛 -专利权人：广州阿凡提生物技术有限公司
申请日： 2023-03-01 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开一种三重荧光定量PCR的方法，涉及PCR检测领域。该三重荧光定量PCR的方法，采用荧光定量PCR技术对非洲猪瘟病野毒和疫苗毒进行检测，同时检测ASFV的CD2V基因，MGF360‑14L基因和P72基因。该三重荧光定量PCR的方法，有效检测是否受ASFV的感染及区分ASFV的野毒株和疫苗株，同时经过优化的引物探针序列有效提高了检测的灵敏度，并且本方法中使用了一种化过的PCR反应预混液，能将常规PCR的反应时间从90‑120min缩短至30‑45min以内，十分有效地提高了PCR的检测效率，为ASF的及早及时诊断提供了新的参考方法。
一种三重荧光定量 pcr 方法

[发明专利]金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌三重荧光定量PCR检测的引物、探针及方法建立-CN201810599552.7在审
发明人：黄梅清;郑敏;陈秀琴;蔡羲;吴南洋 -专利权人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2018-06-12 - 公布日： 2018-09-25 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明涉及用于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌三重荧光定量PCR检测的引物、探针及方法建立，属于生物检测技术领域。本发明提供了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌三重荧光定量PCR检测的引物和探针，包括分别以金黄色葡萄球菌nuc基因、大肠杆菌O157：H7 wzx基因、沙门氏菌invA基因为对象的三组引物和探针，并建立了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌0157：H7、沙门氏菌三重荧光定量PCR方法。本发明的PCR检测方法灵敏度高且具有很好的重复性。
金黄色葡萄球菌沙门氏菌大肠杆菌探针引物荧光定量PCR检测大肠杆菌O157 沙门氏菌invA 生物检测技术荧光定量PCR 灵敏度

[发明专利]同步检测草莓疫霉和树莓疫霉的三重PCR引物及其扩增方法和用途-CN201410472466.1有效
发明人：姜一;郭京泽;刘鹏;林宇;廖芳;李关荣;崔铁军;罗加凤 -专利权人：天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心
申请日： 2014-09-17 - 公布日： 2016-11-30 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种同步检测莓类植物上两种检疫性疫霉的三重PCR引物及其扩增方法与用途，涉及3套引物，即疫霉属通用引物、草莓疫霉特异引物和树莓疫霉特异引物，其中通用引物用于菌丝基因组DNA的质量控制，建立三重PCR分子检测，经琼脂糖凝胶电泳观察，疫霉属菌株均应出现884bp的扩增片段，草莓疫霉还应出现615bp特异片段，树莓疫霉还应出现559bp特异片段，三套引物可有效用于两种疫霉的菌丝基因组DNA三重PCR
同步检测草莓树莓疫霉三重 pcr 引物及其扩增方法用途

[发明专利]用于MDRV、GRV和NDRV鉴别检测的三重RT-PCR引物组及其试剂盒-CN202310767586.3在审
发明人：陈仕龙;胥焯然;陈少莺;程晓霞;王劭;郑敏;肖世峰 -专利权人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2023-06-27 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及用于番鸭呼肠孤病毒、鹅呼肠孤病毒和新型鸭呼肠孤病毒鉴别检测的三重RT‑PCR引物组及其试剂盒，引物组的序列如SEQ ID NO.1‑6。本发明的三重PCR反应，3组引物的添加量比为0.55：0.3：0.4。本发明建立了对三种水禽呼肠孤病毒的三重RT‑PCR检测方法，引物设计及反应条件的优化是多重PCR成功建立的关键技术，多重PCR主要存在的问题是扩增效率不均衡。
用于 mdrv grv ndrv 鉴别检测三重 rt pcr 引物及其试剂盒

[发明专利]一步三重RT－PCR快速检测百合三种病毒的方法-CN200710178693.3无效
发明人：明军;徐榕雪;刘春;穆鼎;汤庚国;王晓武;刘博 -专利权人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所
申请日： 2007-12-04 - 公布日： 2008-07-16 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及“一步三重RT－PCR快速检测百合三种病毒的方法”，属病毒检测领域。一步三重RT－PCR快速检测百合三种病毒的方法，所述三重RT－PCR扩增体系中含有下列三对引物CMV1/CMV2，LSV1/LSV2，LMoV1/LMoV1。本发明所选引物特异性非常强，所提取的植物总RNA不需要先转录成cDNA，cDNA第一链的合成(反转录)与多重PCR一步完成，且一次能检测三种病毒，减少步骤，提高效率；通过特异序列比对验证扩增目标的真实性
一步三重 rt pcr 快速检测百合病毒方法

[发明专利]一种无需提取RNA的马铃薯病毒一步三重定性检测方法-CN202111500599.1在审
发明人：李经纬;张万萍;徐秀红;裴芸;何敏;陆锦彪 -专利权人：贵州大学
申请日： 2021-12-09 - 公布日： 2022-02-08 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种无需提取RNA的马铃薯病毒一步三重定性检测方法，包括以下步骤：以有感染病毒症状，但不知其具体病毒的“紫花白”马铃薯试管苗作为样品，配置三重One‑step RT‑PCR反应体系；进行PCR本发明建立了基于微量取样法和一步逆转录链式聚合反应的三重病毒基因检测方法，该方法中引物定性检测准确率100%，检测结果根据取样部位假阴性率0.5%，假阳性率0%。本发明的有益效果在于：显著简化RT‑PCR中RNA提取、纯化及逆转录等步骤，一次PCR操作可同时检测3种马铃薯病毒，显著节省病毒检测的成本和时间。
一种无需提取 rna 马铃薯病毒一步三重定性检测方法

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