[发明专利]利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方法及其应用有效

专利信息
申请号: 202210643367.X 申请日: 2022-06-09
公开(公告)号: CN114958822B 公开(公告)日: 2023-10-27
发明(设计)人: 董维亮;刘婧媛;王彤;周小力;周杰 申请(专利权)人: 南京工业大学
主分类号: C12N11/16 分类号: C12N11/16;C12N1/20;C09K17/14;C12R1/01;C09K101/00
代理公司: 江苏致邦律师事务所 32230 代理人: 尹妍;徐蓓
地址: 211816 江*** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明涉及利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方法及其应用,取待成膜菌株和粘细菌分别培养后,离心制成菌悬液;将待成膜菌株和粘细菌的菌悬液共同转接至成膜培养基培养,形成菌膜;所述成膜培养基为CYE培养基、CYE稀释培养基或MSM培养基;所述CYE稀释培养基为稀释50倍的CYE培养基。发明固定化菌膜采用了一种通过结合黏细菌建立生物粘附膜结构提高外源微生物菌群的降解效率和环境稳定性的新策略。降解菌群经过生物粘附成膜后,其对环境变化的耐受性显著提高,尤其是对酸性条件和高底物浓度环境的鲁棒性更强。生物膜结构为降解体系提供的保护,有助于建立多种微生物的共存关系,并起到保护和维稳结构的作用。
搜索关键词: 利用 细菌 构建 生物 粘附 固定 化菌膜 方法 及其 应用
【主权项】:
暂无信息
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京工业大学,未经南京工业大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/202210643367.X/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方法及其应用-202210643367.X
  • 董维亮;刘婧媛;王彤;周小力;周杰 - 南京工业大学
  • 2022-06-09 - 2023-10-27 - C12N11/16
  • 本发明涉及利用黏细菌构建生物粘附固定化菌膜的方法及其应用,取待成膜菌株和粘细菌分别培养后,离心制成菌悬液;将待成膜菌株和粘细菌的菌悬液共同转接至成膜培养基培养,形成菌膜;所述成膜培养基为CYE培养基、CYE稀释培养基或MSM培养基;所述CYE稀释培养基为稀释50倍的CYE培养基。发明固定化菌膜采用了一种通过结合黏细菌建立生物粘附膜结构提高外源微生物菌群的降解效率和环境稳定性的新策略。降解菌群经过生物粘附成膜后,其对环境变化的耐受性显著提高,尤其是对酸性条件和高底物浓度环境的鲁棒性更强。生物膜结构为降解体系提供的保护,有助于建立多种微生物的共存关系,并起到保护和维稳结构的作用。
  • 一种固定化酶法制备谷胱甘肽的方法和应用-202210883616.2
  • 陈晖;肖明华;刘秀继;姚骏;李志军;方荣 - 安琪酵母股份有限公司
  • 2022-07-26 - 2023-04-07 - C12N11/16
  • 本发明具体涉及一种固定化酶法制备谷胱甘肽的方法和应用。本发明提供的谷胱甘肽的制备方法包含,以酿酒酵母单倍体子囊孢子为固定酶催化剂催化底物反应合成谷胱甘肽,以磷酸烯醇式丙酮酸ATP原位再生反应体系为供能系统,所述酿酒酵母单倍体子囊孢子被敲除或失活细胞壁β‑葡聚糖合成基因中的一种或两种以上的组合,且GSH1基因、GSH2基因和PYK1基因共表达。本发明以同时产GSH1、GSH2和丙酮酸激酶的酿酒酵母单倍体子囊孢子为固定酶催化剂催化合成谷胱甘肽,不再需要外源添加三种酶,大幅降低原料成本,得到的产物易纯化,制备得到的谷胱甘肽纯度高。
  • 一种利用菌丝球固定重组毕赤酵母并实时观察荧光的方法-202211522787.9
  • 张建国;郑潇;丛文杰 - 上海理工大学
  • 2022-11-30 - 2023-03-14 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种利用菌丝球固定重组毕赤酵母并实时观察荧光的方法,其中主要包括以下步骤:取黑曲霉孢子液接种于PDA培养基中形成黑曲霉菌丝球,构建重组毕赤酵母,用制备好的菌丝球固定重组毕赤酵母,再将吸附了重组毕赤酵母的菌丝球置于凹形载玻片中培养,并利用荧光显微镜对绿色荧光进行观察等五个步骤。本发明通过黑曲霉菌丝球的菌丝对重组毕赤酵母进行吸附,并使用流动的培养基进行培养,一方面菌丝球的菌丝吸附不会对重组毕赤酵母有任何损害,可以使重组毕赤酵母更好的生长;另一方面可以完整地观察重组酵母的生长情况和绿色荧光蛋白的表达情况,有利于绿色荧光的观察。
  • 一种以丝状真菌为载体强化反硝化细菌脱氮的方法-201810533296.1
  • 缪恒锋;周梦娟;阮文权 - 江南大学
  • 2018-05-29 - 2021-05-28 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种以丝状真菌为载体强化反硝化细菌脱氮的方法,属于污水生物处理技术领域。本发明方法包括:接种适量的泥水混合液于反硝化富集培养液中培养,得到反硝化细菌的菌悬液;接种Talaromyces flavus S1斜面培养基接种于PDB培养基中,摇床培养获得成熟的菌丝球;将反硝化细菌菌悬液接种到含有成熟菌丝球的反硝化培养液中,以强化反硝化细菌的脱氮效果,且重复收集菌丝球。本发明方法中使用的Talaromyces flavus S1菌丝球,比目前已有的Trichodermavirid菌丝球固定化反硝化细菌的脱氮效果好,其不仅具有操作简单、沉降性能好和重复利用率高等优点,还强化反硝化细菌的脱氮效果,对今后反硝化细菌的实际应用提供依据,还开拓了Talaromyces flavus S1的实际应用前景。
  • 一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法-201710464992.7
  • 杨革;刘胜格;巩志金;车程川;刘金锋 - 曲阜师范大学
  • 2017-06-19 - 2020-11-24 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法,是由以下步骤获得的:副球菌接种至富集培养基,摇床培养,将所得菌体悬浮于无菌生理盐水中,得反硝化细菌菌悬液;绿色木霉接种至固体培养基上培养,无菌水洗涤,低温保存,得孢子悬浮液;将反硝化细菌菌悬液和孢子悬浮液接种至菌丝球培养基中摇床培养,得绿色木霉为载体固定化反硝化细菌的混合菌丝球。本发明的方法具有操作简便、培养时间短、可重复使用、沉降性能好的优点,制备的混合菌丝球可显著降低水体中的氮素含量,改善水质状况,使污水达到排放标准,且无亚硝酸盐积累,降低环境污染,对于大规模利用副球菌处理污水具有重要意义。
  • 一种丝状真菌固定化酵母的制备方法及其应用-202010854799.6
  • 吴晓彤;秦晓瑜;刘丹;刘子正;郭金欣 - 内蒙古大学
  • 2020-08-24 - 2020-11-17 - C12N11/16
  • 本申请公开了一种丝状真菌固定化酵母的制备方法及其应用。该丝状真菌固定化酵母的制备方法包括以下步骤:(1)产黄青霉预培养(2)固定化酵母培养:将酿酒酵母与产黄青霉孢子在一定条件下培养,产黄青霉菌丝体将酿酒酵母包裹固定;(3)预发酵灭活产黄青霉:产黄青霉菌丝体包裹固定的酿酒酵母进行预发酵,随着酒精度的升高杀死产黄青霉,形成固定化酵母;(4)采用丝状真菌固定化酵母的制备方法制成的固定化酵母应用于酿造红树莓酒,具有品质风味更好的技术效果。
  • 一种具有清除多种污染物功能的共固定化菌丝球的制备方法及其应用-201610825353.4
  • 燕红;国巍;杜霞;李琳 - 哈尔滨理工大学
  • 2016-09-14 - 2019-03-26 - C12N11/16
  • 一种具有清除多种污染物功能的共固定化菌丝球的制备方法及其应用,涉及一种共固定化菌丝球的制备方法及其应用。本发明是要解决现有菌丝球的降解功能较为单一,降解效果不佳的问题。方法:一、制备烟曲霉菌孢子悬液和蜡样芽孢杆菌菌悬液;二、取烟曲霉菌孢子悬液和蜡样芽孢杆菌菌悬液,一起接入到菌丝球成球培养基中,摇床培养,即得到复合菌菌丝球。共固定化菌丝球用于降解木质素、纤维素、半纤维素、染料和重金属离子。该复合菌菌丝球不仅能处理造纸废水,还可用于处理染料废水和重金属离子废水,且在碱性和温度较高的体系中,仍具有较好的处理效果。本发明用于废水处理领域。
  • 一种磁载体固定化微生物活菌制剂及其制备方法和应用-201510201615.5
  • 李明智;梅荣武;韦彦斐;张宇;王慧荣;许青兰;徐佳佳 - 浙江省环境保护科学设计研究院
  • 2015-04-24 - 2017-01-11 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种磁载体固定化微生物活菌制剂及其制备方法和应用,磁载体固定化微生物活菌制剂包括磁载体及固定化在磁载体上的生物活菌,所述生物活菌为乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter‑calcoacetcus)CGMCC 6820、产朊假丝酵母(Candida sp.)CGMCC 2.1495和解淀粉芽胞杆菌(Bacillus sp.)CICC 21290。本发明的磁载体固定化微生物活菌制剂应用于活性污泥法或生物膜法污水处理工艺中,进行污泥原位减量,将磁载体固定化微生物活菌制剂添加到污水中进行处理,可以在提高生化系统处理效果下,降低系统污泥产率,实现剩余污泥的源头减量化。经过本发明活菌制剂的强化调理后,出水COD、NH3‑N、TN、TP、SS浓度将比原出水降低10%以上,单位COD产泥量降低30%以上。
  • 一种以花粉为载体的固定化酶及其制备方法-201610556371.7
  • 黄凤洪;郑明明;黄娟;向霞 - 中国农业科学院油料作物研究所
  • 2016-07-14 - 2016-11-16 - C12N11/16
  • 本发明涉及一种以花粉为载体的固定化酶及其制备方法,该固定化酶由载体与酶以吸附的方式相结合所形成,所述载体为花粉或者改性后的花粉;所述改性的方法为表面修饰或者磁性修饰,或者兼有表面修饰和磁性修饰。本发明以花粉颗粒或者改性花粉颗粒对酶进行吸附固定化,有效提高酶的稳定性与催化活性,同时,花粉形貌规整,表面呈多孔结构且易于修饰,可为酶固定化提供适宜的微环境,避免酶之间的聚集失活和使用过程中的流失;与常规吸附材料相比具有安全性高,天然易得,绿色环保等优点。
  • 一种利用酿酒酵母二酪氨酸层疏松型孢子固定化酶的方法-201410199369.X
  • 高晓冬;中西秀树;施李兵;李子杰 - 江南大学
  • 2014-05-12 - 2014-08-06 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种利用酿酒酵母二酪氨酸层疏松型孢子固定化酶的方法,属于微生物和固定化酶技术领域。本发明将带有自身信号肽的α-半乳糖苷酶基因插入到质粒pRS424-TEFpr上,得到重组质粒pRS424-TEFpr-MEL1,然后转化OSW2基因缺陷型酿酒酵母,通过以醋酸盐为唯一或主要碳源,并辅以缺乏氮源的条件培养重组酵母,最终收集纯化获得固定化酶。该微胶囊固定化酶一方面可以利用二酪氨酸层将酶包裹在孢子的周质间隙上,同时二酪氨酸层变得疏松后便于底物分子与酶分子进行接触,提高了反应效率。这种独特的空间定位提高了对蛋白酶的稳定性、无需蛋白纯化和固定化操作、降低生产成本等。
  • 一种以酿酒酵母孢子为载体的固定化酶的制备方法-201310422568.8
  • 中西秀树;高晓冬;张海妮;李子杰 - 江南大学
  • 2013-09-16 - 2013-12-11 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种以酿酒酵母孢子为载体的固定化酶的制备方法及固定化酶,其通过使用一种酿酒酵母缺陷型菌株△dit1,此菌株产生的孢子壁不含最外的二酪氨酸层,暴露在最外面的一层是壳聚糖,将酶直接固定在此缺陷型的孢子上,得到固定化酶。本发明直接通过培养酿酒酵母△dit1菌株获得大量的酿酒酵母的子囊孢子,再加以破壁纯化得到目的产品,就可以做相应的应用,而无需获得像一般固定化酶所需的载体,方法简便,易于操作,节省费用。
  • 一种增加酵母细胞微胶囊壁材孔径的方法-201210590465.8
  • 石国荣 - 湖南农业大学
  • 2012-12-30 - 2013-04-24 - C12N11/16
  • 经加入适量的扩孔剂进行处理酵母细胞壁使大分子物质进入到细胞壁内。本发明方法中所用的原料、设备均为常见的普通原料、设备,避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖,大大地降低了生产成本;采用甘露聚糖酶降解部分酵母细胞壁,在间隔超声处理过程中能有效增大酵母细胞孔径,不会过度对同一部位进行持续水解酵母细胞壁,有效控制整个酵母细胞壁的孔径大小;本发明方法操作简单,极大的延长了大分子蛋白的体外活性,保证了大分子蛋白的稳定性,降低了其生产成本,简化了生产过程。
  • 一种中空多聚糖微球固定化酶及其制备方法-200810117763.9
  • 杨森;周克斌;倪德志;王雷 - 中国农业大学
  • 2008-08-05 - 2010-02-10 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种中空多聚糖微球固定化酶及其制备方法。该固定化酶,包括酶和载体,所述载体是中空多聚糖微球;所述中空多聚糖微球按照如下方法制备:在恒温条件下,将酵母在液体中进行碳化,得到中空多聚糖微球;所述恒温的温度选自150-240℃之间的任一温度。本发明还公开了该中空多聚糖微球固定化酶的制备方法。本发明的中空多聚糖微球固定化酶的制备方法中制备载体的原料来源广泛,载体的制备、表面修饰和酶的固定化技术简单易行,且载体具有高比表面积、大内部空间、丰富的表面官能团、以及良好的生物相容性等特点。
  • 一种生物相容性中空多聚糖微球及其制备方法-200810117761.X
  • 杨森;周克斌;倪德志;王雷 - 中国农业大学
  • 2008-08-05 - 2010-02-10 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种生物相容性中空多聚糖微球及其制备方法。本发明的生物相容性中空多聚糖微球的制备方法是在恒温条件下,使液体中的酵母碳化,得到中空多聚糖微球,所述恒温的温度选自150-240℃之间的任一温度。其中,所述液体可为水,也可为盐酸、硫酸、硝酸、醋酸、氯化钠、氯化钾、醋酸钾、乙醇、乙醛或戊二醛的水溶液。所述酵母可以是死的或活的。该方法制备的中空多聚糖微球为球形或苹果形或坛子形,也可是球壁完整的中空微球或球壁上有一个孔的中空微球。本发明的生物相容性中空多聚糖微球的制备方法中所用原材料廉价易得,工艺简单易行,成本低廉且制备的中空多聚糖微球表面含有的-OH,-C=O等功能团,具有良好的生物相容性。
  • 一种磁性中空复合微结构固定化酶及其制备方法-200810117760.5
  • 杨森;周克斌;倪德志;王雷 - 中国农业大学
  • 2008-08-05 - 2010-02-10 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种磁性中空复合微结构固定化酶及其制备方法。该固定化酶,包括酶和用于固定所述酶的载体,其中,所述载体是磁性中空多聚糖微球,所述磁性中空多聚糖微球由核和壳组成,所述壳包覆于所述核的外表面,所述壳由铁酸盐组成,所述核为中空多聚糖微球,所述中空多聚糖微球按照如下方法制备:在恒温条件下,将酵母在液体中进行碳化,得到中空多聚糖微球;所述恒温的温度选自150-240℃之间的任一温度。本发明还公开了该固定化酶的制备方法。本发明的磁性中空复合微结构固定化酶的酶蛋白负载量高、酶活性高、酶的稳定性和操作稳定性强,且在外加磁场条件下该固定化酶易于回收。
  • 基于红细胞载体的fish-in-net固定化酶-200810051591.X
  • 吕明;李正强;吕博群;吴卓夫;刘佳音 - 吉林大学
  • 2008-12-15 - 2009-05-13 - C12N11/16
  • 本发明涉及到具有高活性、高稳定性的生物/无机催化反应器——基于红细胞载体的fish-in-net固定化酶,反应器的催化核心是利用红细胞包封的生物催化材料,其是通过低渗的方法制备载体红细胞,并将目地具有催化作用的生物材料通过扩散的方法导入上述载体红细胞,此载体重新封装后用于后续的固定化操作;固定化操作得到生物—无机催化反应器,壳为无机网格材料,催化中心是红细胞膜包封的生物材料。本发明的反应器中的生物材料具有较高的活性和稳定性,大幅度降低固定化进程中各种有机及无机材料对生物材料的结构及活性的影响,当载入目地起催化作用的生物材料分子尺度(直径)小于50nm,此反应器可以正常构建及执行催化功能。
  • 以菌丝球作为载体的微生物固定化方法-200710072148.6
  • 马放;山丹;王晨;张斯 - 哈尔滨工业大学
  • 2007-04-29 - 2007-10-31 - C12N11/16
  • 以菌丝球作为载体的微生物固定化方法,本发明涉及一种以菌丝球作为载体的微生物固定化方法。它是为了解决现有的以菌丝球作为载体的微生物固定化方法操作步骤复杂及耗时时间长的问题。以菌丝球作为载体的微生物固定化方法通过以下步骤实现:一、富集培养;二、制备孢子悬液;三、同时接种,即达到好氧细菌与曲霉菌孢子体同时培养的目的。本发明节省了冲洗、制备细菌悬液和震荡吸附的过程,固定化时间仅在48h左右,不但缩短了时间而且减少了步骤,大大提高了效率。采用本发明的方法形成的混合菌丝球内部无论菌丝交联与否,细菌都非常均匀的排列生长在每一根菌丝上,而且单位面积上固定化生长的细菌数量也明显多于吸附法形成的混合菌丝球。
  • 固定化菌体的制备方法及其应用-200510122787.X
  • 杨树林;沈薇;宁长发;高力虎;孟广荣;李新柱;梁广;陆晓;曾亮亮 - 南京理工大学
  • 2005-12-02 - 2007-06-13 - C12N11/16
  • 本发明公开了一种固定化菌体的制备方法。其步骤为:丝瓜海绵体的制备,即成熟丝瓜晒干后除去外皮得到丝瓜海绵体纤维,然后将其剪成圆盘,放入沸水中煮后,洗净、在蒸馏水中浸泡,将充分浸泡的海绵体圆盘干燥;孢子的制备,将木霉接种到斜面培养基上,在20~40℃培养3~5天,形成孢子备用;菌悬液的制备,将孢子用生理盐水配制成菌悬液;菌体的固定化,将菌悬液接种于装有利于菌丝体萌发的培养基和海绵体圆盘的锥形瓶中,20~30℃下100~200rpm培养2~3天得到固定化菌体。本发明的优点为:丝瓜海绵体孔隙率高,菌丝体固定其上不产生致密缠绕,能高效吸附废水中重金属;丝瓜海绵体是一种天然多孔状纤维,不含有害物质,不会对水体造成二次污染。
  • 酵母细胞的固定化方法-200610099243.0
  • 谭天伟;俞建良;张栩 - 北京化工大学
  • 2006-07-21 - 2007-01-03 - C12N11/16
  • 本发明涉及一种固定化酵母细胞的方法,其中使用植物茎秆或其压榨后剩余的渣作为载体,该方法包括下列步骤:a)将植物茎秆粉碎或进一步压榨去除其中富含的水分,随后灭菌;b)将酵母细胞接种入液体培养基,随后按控制量将含有酵母细胞的液体培养基与灭菌的植物茎秆或其压榨后剩余的渣混合,使得酵母细胞的培养达到固态或半固态培养;c)随后加入增殖培养基继续增殖培养。
  • 一种戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶的固定化方法-200610011742.X
  • 罗晖;史芫芫;于慧敏;李强;沈忠耀 - 北京科技大学;清华大学
  • 2006-04-18 - 2006-10-11 - C12N11/16
  • 本发明提供了一种戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶的固定化方法,属于生物酶工程技术领域。工艺步骤为:培养并收集具有戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶活性的游离细胞;收集得到的游离细胞重悬于Ph 6~9缓冲溶液中,然后加入终浓度为5~100mmol/L的交联剂;0~45℃下,交联1~4小时,离心,所得固体用缓冲液冲洗,得到以游离态菌为载体的固定化戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶。本发明的优点在于:与传统的固定化酶、固定化细胞方法相比,具有明显的优势,结合膜分离工艺,展现了强有力的工业应用前景。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top