[发明专利]一种骨骼肌细胞体外高效培养的方法

摘要

本发明提供了一种骨骼肌细胞体外高效培养的方法，本发明属于细胞培养领域，本发明的方法包括试验器具的准备、骨骼肌的提取、骨骼肌的消化、骨骼肌悬液的制备和骨骼肌悬液得培养五个步骤，本发明方法采用了差速铁壁法去除成纤维细胞，不但直接有效，同时巧妙地避免了表面包膜细胞以及细菌的混入，降低了细胞、细菌污染的同时，大大提高了目的细胞的纯度，分离细胞时即可接近100％，本方法能够获得高纯度、高活率、高活性同时污染风险极低的骨骼肌细胞，培养的细胞分化好、细胞活力高，具有较大的推广意义。

主权项

1.一种骨骼肌细胞体外高效培养的方法，其特征在于：所述骨骼肌细胞体外高效培养的方法包括以下步骤：S1试验器具的准备：将眼科剪刀、眼科镊子、手术刀、培养皿、15mL离心管、移液枪和枪头用紫外照射20~40min灭菌备用；S2骨骼肌的提取：用步骤S1准备好的眼科剪刀剪开SD大鼠后肢皮肤，暴露腿部骨骼肌，用步骤S1准备好的手术刀小心割取后肢大腿骨骼肌，所述的后肢大腿骨骼肌为表面无附着膜和脂肪组织的骨骼肌，然后将所述的骨骼肌置于盛有PBS的无菌培养皿中，然后吸取消化液于培养皿中；S3骨骼肌的消化：将步骤S2剪取的骨骼肌在无菌的PBS培养皿中清洗去除骨骼肌中的脂肪组织后放置于含有消化液的培养皿中，采用步骤S1准备好的眼科剪刀，剪碎所述的骨骼肌组织，使得骨骼肌组织呈现1cm²不规则碎片，轻轻摇匀，置于室温下消化20~40min；S4骨骼肌悬液的制备：收集步骤S3中消化好的骨骼肌组织碎片于步骤S1准备好的50mL离心管中，用消化液反复冲洗所述的骨骼肌组织碎片，直至骨骼肌组织碎片全部收集于50mL离心管中，轻轻吹打混合均匀得骨骼肌悬液悬液；S5骨骼肌悬液得培养：将步骤S4中的骨骼肌悬液悬液于800~1200rmp转速下室温离心8~12min，离心结束后小心去上清液，然后再用含有质量分数为20wt%的胎牛血清的DMEM培养液重悬所述的骨骼肌碎片，轻轻吹打再混匀制成悬液，然后将悬液均匀转移至6孔板中，轻轻摇匀，标记时间后置于37℃、体积分数为5%CO₂和饱和湿度的培养箱中培养。