[发明专利]一种人正常PDLCs的分离和培养的方法

摘要

本发明公开了一种人正常PDLCs的分离和培养的方法，具体涉及细胞培养技术领域，包括以下步骤：步骤一，取第一前磨牙放置于烧杯容器内，向烧杯容器内倒入pH值在7.2‑7.4的PBS缓冲液对第一前磨牙进行冲洗，然后重复冲洗五次，去除第一前磨牙表面的污垢和杂质；步骤二，将冲洗后的第一前磨牙放在无菌环境下进行晾干后，刮取第一前磨牙根部外壁上的1/3牙周膜，添加至容器内。本发明通过对人体牙周膜细胞进行提取，并对提取后的细胞进行多次PBS冲洗，细胞经过PBS清洗会去除细胞中的杂质，能够保持细胞能在适合的PH值范围之内，并对牙周膜细胞进行消化离心，使得分离后的牙周膜细胞便于进行培养，提高了牙周膜细胞在培养过程中的成活率。

主权项

1.一种人正常PDLCs的分离方法，其特征在于，具体包括如下步骤：步骤一，取第一前磨牙放置于烧杯容器内，向烧杯容器内倒入pH值在7.2‑7.4的PBS缓冲液对第一前磨牙进行冲洗，然后重复冲洗五次，去除第一前磨牙表面的污垢和杂质；步骤二，将冲洗后的第一前磨牙放在无菌环境下进行晾干后，刮取第一前磨牙根部外壁上的1/3牙周膜，添加至容器内；步骤三，向步骤二中的容器内倒入30‑40ml II型胶原酶和dispase酶的混合液，使混合液淹没容器内的牙周膜，然后在容器上覆盖保鲜膜对容器进行密封，并放置于37℃的温箱中进行消化，消化时间为20‑40分钟；步骤四，消化完成后，打开温箱，取出容器并将内部的溶液倒入离心机内，对溶液进行离心，离心结束后，去除溶液表面的上层清液，并对溶液进行PBS吹打冲洗3遍，获得基液。