[发明专利]一种基于微滴式数字PCR技术的检测真菌的试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201910514218.1 | 申请日： | 2019-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN110616253A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 李辉桃 | 申请（专利权）人： | 深圳市妇幼保健院 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/74 |
| 代理公司： | 44376 广州高炬知识产权代理有限公司 | 代理人： | 董博 |
| 地址： | 518000 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基于数字PCR技术的检测真菌的试剂盒，所述试剂盒包含：(1)正向引物、反向引物、探针(2)缓冲液和PCR扩增酶的混合试剂；(3)真菌基因组DNA提取试剂；(4)阳性对照和阴性对照；(5)无RNA酶的超纯水。在所述试剂盒的基础上，本发明还提供了基于数字PCR技术的检测真菌的方法。经实验证明，本发明提供的试剂盒具有特异性好、灵敏度高和重复性好的优势，由此建立的基于数字PCR技术的检测真菌的方法灵敏、准确、简便和快速，对真菌定性和定量检测均具有指导意义。 | ||
| 搜索关键词： | 试剂盒 真菌 数字PCR 检测 真菌基因组DNA 定量检测 反向引物 混合试剂 提取试剂 阳性对照 阴性对照 正向引物 超纯水 缓冲液 灵敏度 探针 灵敏 定性 | ||
【主权项】：
1.一种基于微滴式数字PCR技术的检测真菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：/n(1)正向引物：5'-GTGAATCATCGAATCTTTGAAC-3'；/n反向引物：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'；/n探针：5'-FAM-ATTGCTTGCGGCGGTAACGTCC–TRAMA-3'，其中5端标记的荧光基团是FAM，3端标记的淬灭基团是TRAMA；/n(2)缓冲液和PCR扩增酶的混合试剂；/n(3)真菌基因组DNA提取试剂；/n(4)阳性对照和阴性对照；/n(5)无RNA酶的超纯水。/n
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- 本发明公开了一种折叠引物的PCR扩增方法，所述PCR扩增有预退火PCR扩增和直接分级退火PCR扩增两种扩增方法。本发明能避免引物之间的竞争，实现在一个试管内互不干扰地进行多重反应；尤其是预退火PCR在无酶环境下先行反复分级退火，使所有靶序列都与对应引物充分退火，在反复中错配的引物可重新选择与靶序列退火；后续PCR保证靶序列的特异扩增始终占据绝对优势，有效地解决传统PCR极易产生非特异扩增、在多重反应中难于扩增低拷贝靶序列等弊病，提高了检出SNP等单碱基变异，同时检出多种靶核酸，特别是低拷贝靶核酸的特异性和敏感性，具有超灵敏、高特异、高通量的优点。
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- 李昂 - 北京致雨生物科技有限公司
- 2019-01-28 - 2019-11-22 - C12Q1/686
- 本实用新型公开了一种数字PCR微滴生成系统，包括用于输送样本溶液的微管、用于驱动微管移动的移动驱动机构、用于驱动微管往复振动的振动驱动机构，以及用于装载油相的第一容器，系统还包括控制器及用于探测油相液面位置的液面探测机构，液面探测机构包括液面感知模块和测距模块，液面感知模块、测距模块和移动驱动机构分别与控制器连接，控制器接收液面感知模块和测距模块反馈的信息，并根据所获取的信息控制移动驱动机构动作。本实用新型利用微管本身预先主动对油相液面高度进行探测，根据探测结果确定在微滴生成时微管的下降高度，降低了对微滴生成容器中注油量的精准要求，更保证了微管针尖在油相液面下的深度，为微滴生成提供可靠的前提条件。
- 一种鉴定11型鸭疫里默氏菌是否对氟喹诺酮类药物耐药的方法-201910860174.8
- 程龙飞;万春和;黄瑜;傅光华;刘荣昌;施少华;陈红梅;傅秋玲 - 福建省农业科学院畜牧兽医研究所
- 2019-09-11 - 2019-11-19 - C12Q1/686
- 本发明提供一种鉴定11型鸭疫里默氏菌是否对氟喹诺酮类药物耐药的方法及其应用，属于禽病学研究领域，采用了引物和内切酶（EcoRV酶），建立能够鉴定11型鸭疫里默氏菌是否对氟喹诺酮类药物耐药的方法，该方法的敏感性和PCR相当，仅仅只需对PCR产物进行EcoRV酶酶切后再进行常规琼脂糖凝胶电泳，即可根据电泳条带鉴定11型鸭疫里默氏菌是否对氟喹诺酮类药物耐药，建立的方法简单实用、方便快捷、无需进行药敏试验，为在家禽中开展11型鸭疫里默氏菌是否对氟喹诺酮类药物耐药提供快速检测方法，将指导临床科学用药，具有十分重要的研究意义。
- 一种用于脑脊液疑难病原体诊断的试剂盒-201920030148.8
- 赵志军;夏鹤春;贾伟;牛占峰;康宇婷;苏雅静;乔霞;董洁;赵倩颖;刘学雷;安童童;杨宁爱;杨红;康佳;周云花 - 赵志军
- 2019-01-09 - 2019-11-15 - C12Q1/686
- 本申请公开了一种用于脑脊液疑难病原体诊断的试剂盒，不仅包括试剂盒本体，还包括位于试剂盒本体的固定板、引物板及96孔PCR反应板；固定板上设置有用于固定引物板的第一凹槽和用于放置各离心管的第二凹槽，第二凹槽的个数与离心管的个数一一对应；引物板上设置有用于放置装有多种目标引物的多个试管的第三凹槽，第三凹槽的个数与试管的个数一一对应，一个试管装有一种目标引物，试管口处安装有螺旋密封的盖子。该试剂盒中包含有用于盛放多种目标引物的多个试管的引物板，实际检测多少种引物，就在引物板上设置多少个第三凹槽，放置多少个试管，可实现对多种感染源的诊断，确保临床精准诊断感染病原体类型和调整用药策略，降低患者死亡率。
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