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[发明专利]一种折叠引物的PCR扩增方法-CN201910819034.6在审
发明人： 黄天谊 -专利权人： 黄天谊
申请日： 2019-08-30 - 公布日： 2019-12-03 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了一种折叠引物的PCR扩增方法，所述PCR扩增有预退火PCR扩增和直接分级退火PCR扩增两种扩增方法。本发明能避免引物之间的竞争，实现在一个试管内互不干扰地进行多重反应；尤其是预退火PCR在无酶环境下先行反复分级退火，使所有靶序列都与对应引物充分退火，在反复中错配的引物可重新选择与靶序列退火；后续PCR保证靶序列的特异扩增始终占据绝对优势，有效地解决传统PCR极易产生非特异扩增、在多重反应中难于扩增低拷贝靶序列等弊病，提高了检出SNP等单碱基变异，同时检出多种靶核酸，特别是低拷贝靶核酸的特异性和敏感性，具有超灵敏、高特异、高通量的优点。
退火靶序列引物多重反应特异扩增靶核酸低拷贝预退火分级检出扩增特异性和敏感性单碱基变异互不干扰绝对优势重新选择传统PCR 高通量有效地试管折叠错配灵敏占据保证

[发明专利]疟原虫属特异折叠引物PCR分子诊断试剂盒及使用方法-CN201910596719.9在审
发明人：黄雨婷;黄天谊;张念恒;叶绪芳 -专利权人：贵州省疾病预防控制中心
申请日： 2019-07-02 - 公布日： 2019-11-19 - 主分类号： C12Q1/6893 文献下载
摘要：本发明公开了一种折叠引物预退火PCR疟原虫分子诊断试剂盒，所述试剂盒由1号试剂、2号试剂、模板缓冲液和阳性对照试剂组成，所述2号试剂预装PCR管5μLX20支，由以下组分组成：Tris‑HCl、NH₄SO₄、折叠引物3条、4种核苷酸‑4dNTP；所述2号试剂为冻干剂型或液体剂型，所述折叠引物序列如SEQ ID NO.1‑3所示。本发明试剂盒具有超灵敏、高特异、高通量、省时省力特点，操作简便快捷、试验周期短、检测成本低，能够检出所有6种能感染人的疟原虫，可鉴别是否为恶性疟原虫感染，检出低限达到0.1个虫/μL血，专门用作流行病学监测主动筛查检出低密度感染者即亚显微镜感染或无症状带虫者的分子诊断工具。
折叠疟原虫检出引物恶性疟原虫感染分子诊断试剂盒流行病学监测阳性对照试剂发明试剂分子诊断试验周期液体剂型引物序列感染高通量核苷酸缓冲液试剂盒预退火主动筛冻干省时预装显微镜省力灵敏鉴别检测

[发明专利]折叠引物多重PCR疟疾分子诊断试剂盒及其检测方法-CN201510078743.5有效
发明人： 黄天谊;黄雨婷;张念恒;佘丹娅 -专利权人：贵州省疾病预防控制中心
申请日： 2015-02-13 - 公布日： 2017-11-14 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种折叠引物多重PCR疟疾分子诊断试剂盒及其检测方法。所述试剂盒由含镁模板缓冲液及无镁单一组合试剂组成，包含了板DNA制备和折叠引物PCR反应全套试剂。所述折叠引物以疟原虫Cyt b基因作为靶基因，在疟原虫属、种特异位点进行设计，显著提高了折叠引物PCR检出4种疟原虫的敏感性和特异性，同时简化试剂和试验操作。采用本发明的试剂盒进行检测，使试剂复杂操作繁重的传统套式/多重PCR简化为单一试剂、单管一步扩增反应，即可同时检出和鉴定4种疟原虫单独或混合感染，检出单种感染的低限均达到或接近1个虫/μl血；在混合感染高、低密度相差100倍时仍能同时检出和准确鉴定4种原虫。是省市各级医院和实验室疟疾确诊和鉴别诊断的可靠手段。
折叠引物多重 pcr 疟疾分子诊断试剂盒及其检测方法

[发明专利]一种折叠引物及其PCR扩增方法-CN201510044665.7有效
发明人： 黄天谊 -专利权人： 黄天谊
申请日： 2015-01-29 - 公布日： 2017-06-06 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及核酸扩增技术及其应用，尤其是一种折叠引物及其PCR扩增方法，通过设定每条(对)折叠引物不同的退火和折叠温度，当低于其折叠温度时引物的3’5’端互补退火自我封闭；从根本上阻止引物与任何非靶序列之间的错配退火，有效排除引物之间的竞争，有利于实行分级退火实现在一个试管内互不干扰地进行多重反应；使靶序列的特异扩增占据优势地位，有效地解决传统PCR普通引物极易产生非特异扩增、在多重反应中难于扩增低拷贝靶序列等弊病；因此大大增强了检出SNP等单碱基变异的特异性和敏感性，有利于同时扩增和检出样本中多种靶核酸，特别是其中的低拷贝靶核酸。
一种折叠引物及其 pcr 扩增方法

[实用新型]一种预装PCR管的疟疾分子诊断试剂盒-CN201520197275.9有效
发明人：黄雨婷;黄天谊;张念恒;佘丹娅 -专利权人：贵州省疾病预防控制中心
申请日： 2015-04-02 - 公布日： 2015-09-30 - 主分类号： C12M1/34 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种预装PCR管的疟疾分子诊断试剂盒，包括盒体，所述盒体内部设置有底层托板和顶层托板，所述盒体两侧内壁上设置有下滑槽和上滑槽，所述底层托板和顶层托板通过滑轨分别安装在下滑槽和上滑槽内，在底层托板和顶层托板上分别设置有底层放置孔和顶层放置孔，所述顶层放置孔和底层放置孔内还设置有调整部件，所述盒体内还设置有检测组件和模板提取组件，所述检测组件包括至少一支置于底层放置孔内的预装试剂管，所述模板提取组件包括至少一支置于顶层放置孔内的离心管。本实用新型极大的简化了配制试剂的操作步骤，节省了时间，降低检测成本，也减少了操作失误的可能性，同时大大降低了对操作者技术水平的要求。
一种预装 pcr 疟疾分子诊断试剂盒

[发明专利]快速套式PCR疟疾分子诊断试剂盒及检测方法-CN201210061134.5无效
发明人： 黄天谊;郭传坤;黎学铭 -专利权人：广西壮族自治区疾病预防控制中心
申请日： 2012-03-09 - 公布日： 2012-09-19 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速套式PCR疟疾分子诊断试剂盒及检测方法，包括具有自我封闭功能的新型引物，选用疟原虫线粒体基因组内的细胞色素氧化酶基因(cox1)作靶基因，在疟原虫属、种特异位点设计双向半套式引物4个，组合成1对属特异和2个种特异引物；使试剂复杂操作繁重的传统套式/多重PCR简化为单一试剂、单管一步反应，可同时检出和鉴定恶性疟与间日疟原虫单独或混合的感染和三日疟和卵形疟的单独感染，其敏感性与特异性均超过显微镜检查法，达到可检出1个虫/每μl血的水平。是各级医院疟疾确诊和鉴别诊断的可靠手段，也为疟疾防治监测、抗疟药物试验和疟疾疫苗研究以及献血员筛选提供一个简易、经济、灵敏、准确的疟疾诊断工具。
快速 pcr 疟疾分子诊断试剂盒检测方法

[发明专利]疟疾单管－套式/多重PCR基因诊断试剂盒及检测方法-CN200710303516.3无效
发明人： 黄天谊;郭传坤;黎学铭;李锦辉;林珍;毛玮;杜进发 -专利权人：广西壮族自治区疾病预防控制中心
申请日： 2007-12-29 - 公布日： 2008-08-13 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种疟疾单管－套式/多重PCR基因诊断试剂盒及其检测方法。该发明根据4种人疟原虫线粒体细胞色素氧化酶(cox1)基因序列，运用创新的引物设计理念，设计合成疟原虫属特异引物、疟原虫种特异标签引物和公共标签引物等多项优化措施，使传统试剂复杂操作繁重的套式/多重PCR简化为仅用4ul滤纸血样，单管2步反应即可同时检出恶性疟与间日疟原虫，其敏感性与特异性均超过显微镜检查法，达到可检出1个虫/每ul血的水平。不仅可检出疟疾现症病人，也可检出低原虫血症的慢性病人和无症状带虫者；可作为各级医院疟疾确诊和鉴别诊断的可靠手段，也为疟疾防治监测，抗疟药物试验和疟疾疫苗研究以及献血员筛选提供一个简易、经济、灵敏、准确的疟疾诊断工具。
疟疾多重 pcr 基因诊断试剂盒检测方法

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